遠慕教你鑒別和處理細胞污染的方法

一、細菌污染

狀態(tài)：細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀，根據感染細菌的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會渾濁變黃，對細胞生長影響明顯。

預防和補救：

1.仔細檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時放氣時間和壓力足夠！尤其是和儲存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品，連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲存液污染，一定要檢查培養(yǎng)液是否存在渾濁現象！

2.可在培養(yǎng)液或血清中加支原體預防劑。

3.若細胞一旦污染，建議加支原體清除劑，能清楚常見的革蘭氏陰性和陽性菌。 二、霉菌及真菌污染

狀態(tài)：肉眼觀察培養(yǎng)基發(fā)現培養(yǎng)基顏色基本無變化，不渾濁，但是培養(yǎng)基中由絮狀漂浮物，顯微鏡下觀察，若感染真菌可看到分叉細絲狀的結構（不同種類結構不同），若感染霉菌顯微鏡下可看到片狀的結構，不透明，真菌及霉菌對影響細胞的生長影響不大。

預防和補救：

1.保證細胞房的干凈整潔，干燥的環(huán)境(潮濕的環(huán)境利于霉菌及真菌的生長)。

2.控制外來人員進出實驗室。

3.對實驗室及培養(yǎng)箱進行徹底消毒。

4.若細胞非常珍貴，且不易獲得，可以對污染的細胞采取如下操作。

懸浮細胞：收集細胞并離心，用PBS漂洗，重復此操作數次。貼壁細胞：用PBS輕輕沖洗細胞，丟棄，重復此操作數次。

三、支原體感染

狀態(tài)：鏡下黑色，多為多形，培養(yǎng)液一般會渾濁，國內血清很多沒做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中最常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細胞以后，細胞病變不很明顯，只是慢慢死亡。

預防和補救：

預防：實驗室新購買的血清及培養(yǎng)基需檢測是否含有支原體，引進的新品種細胞需做支原體檢測，向培養(yǎng)基中添加預防支原體的抗生素。

補救：向培養(yǎng)基中添加抗生素，（如氧氟沙星10 μg/ml、環(huán)丙沙星10 μg/ml、卡那霉素20~50 μg/ml、四環(huán)素10~50 μg/ml、慶大霉素200μg/ml等抗生素），或者向培養(yǎng)基中添加支原體清除劑清除支原體數天。

四、黑蛟蟲

狀態(tài)：可以穿透濾膜，也可以通過空氣傳播，低倍下為黑色點狀，高倍鏡下可看見黑色的小蟲游來游去，培養(yǎng)液不渾濁，一般不會太影響，細胞還可以用。常常可在同一批號的血清養(yǎng)的細胞中發(fā)現類似現象。

預防和補救：一般黑膠蟲不會影響細胞的生長狀態(tài)，可以嘗試改變培養(yǎng)基的品牌。血清凍融采取逐級凍融的方法。

五、原蟲感染

狀態(tài)：培養(yǎng)液可輕微渾濁，顯微鏡下那些細小的點狀物數量非常多，輕微活動，細胞雖然可用生長但繁殖速度卻明顯減慢，而且細胞狀態(tài)不好，邊緣不清楚，細胞不透亮。他們與細胞可共生，但會與細胞爭奪營養(yǎng)。這種共生是非常普遍的，但他們的數量小，細胞占優(yōu)勢所以不會影響到細胞的正常生長，只有當他們到達一定的數量時就會影響到細胞的生長，最終形成惡性循環(huán)。

除以上污染源外，配液消毒問題、操作問題也是污染原因之一。關于培養(yǎng)基的無菌狀況，取培養(yǎng)基至培養(yǎng)瓶中（不加細胞），37度試培養(yǎng)一段時間后觀察。如果沒有細菌生長就是操作及細胞培養(yǎng)箱環(huán)境的問題。