遠(yuǎn)慕教你鑒別和處理細(xì)胞污染的方法

一、細(xì)菌污染

狀態(tài)：細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀，根據(jù)感染細(xì)菌的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁變黃，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)影響明顯。

預(yù)防和補(bǔ)救：

1.仔細(xì)檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時(shí)放氣時(shí)間和壓力足夠！尤其是和儲(chǔ)存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品，連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲(chǔ)存液污染，一定要檢查培養(yǎng)液是否存在渾濁現(xiàn)象！

2.可在培養(yǎng)液或血清中加支原體預(yù)防劑。

3.若細(xì)胞一旦污染，建議加支原體清除劑，能清楚常見的革蘭氏陰性和陽(yáng)性菌。 二、霉菌及真菌污染

狀態(tài)：肉眼觀察培養(yǎng)基發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基顏色基本無(wú)變化，不渾濁，但是培養(yǎng)基中由絮狀漂浮物，顯微鏡下觀察，若感染真菌可看到分叉細(xì)絲狀的結(jié)構(gòu)（不同種類結(jié)構(gòu)不同），若感染霉菌顯微鏡下可看到片狀的結(jié)構(gòu)，不透明，真菌及霉菌對(duì)影響細(xì)胞的生長(zhǎng)影響不大。

預(yù)防和補(bǔ)救：

1.保證細(xì)胞房的干凈整潔，干燥的環(huán)境(潮濕的環(huán)境利于霉菌及真菌的生長(zhǎng))。

2.控制外來人員進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室。

3.對(duì)實(shí)驗(yàn)室及培養(yǎng)箱進(jìn)行徹底消毒。

4.若細(xì)胞非常珍貴，且不易獲得，可以對(duì)污染的細(xì)胞采取如下操作。

懸浮細(xì)胞：收集細(xì)胞并離心，用PBS漂洗，重復(fù)此操作數(shù)次。貼壁細(xì)胞：用PBS輕輕沖洗細(xì)胞，丟棄，重復(fù)此操作數(shù)次。

三、支原體感染

狀態(tài)：鏡下黑色，多為多形，培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁，國(guó)內(nèi)血清很多沒做支原體陰性檢測(cè)，而支原體是牛血清中最常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細(xì)胞以后，細(xì)胞病變不很明顯，只是慢慢死亡。

預(yù)防和補(bǔ)救：

預(yù)防：實(shí)驗(yàn)室新購(gòu)買的血清及培養(yǎng)基需檢測(cè)是否含有支原體，引進(jìn)的新品種細(xì)胞需做支原體檢測(cè)，向培養(yǎng)基中添加預(yù)防支原體的抗生素。

補(bǔ)救：向培養(yǎng)基中添加抗生素，（如氧氟沙星10 μg/ml、環(huán)丙沙星10 μg/ml、卡那霉素20~50 μg/ml、四環(huán)素10~50 μg/ml、慶大霉素200μg/ml等抗生素），或者向培養(yǎng)基中添加支原體清除劑清除支原體數(shù)天。

四、黑蛟蟲

狀態(tài)：可以穿透濾膜，也可以通過空氣傳播，低倍下為黑色點(diǎn)狀，高倍鏡下可看見黑色的小蟲游來游去，培養(yǎng)液不渾濁，一般不會(huì)太影響，細(xì)胞還可以用。常常可在同一批號(hào)的血清養(yǎng)的細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象。

預(yù)防和補(bǔ)救：一般黑膠蟲不會(huì)影響細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)，可以嘗試改變培養(yǎng)基的品牌。血清凍融采取逐級(jí)凍融的方法。

五、原蟲感染

狀態(tài)：培養(yǎng)液可輕微渾濁，顯微鏡下那些細(xì)小的點(diǎn)狀物數(shù)量非常多，輕微活動(dòng)，細(xì)胞雖然可用生長(zhǎng)但繁殖速度卻明顯減慢，而且細(xì)胞狀態(tài)不好，邊緣不清楚，細(xì)胞不透亮。他們與細(xì)胞可共生，但會(huì)與細(xì)胞爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng)。這種共生是非常普遍的，但他們的數(shù)量小，細(xì)胞占優(yōu)勢(shì)所以不會(huì)影響到細(xì)胞的正常生長(zhǎng)，只有當(dāng)他們到達(dá)一定的數(shù)量時(shí)就會(huì)影響到細(xì)胞的生長(zhǎng)，最終形成惡性循環(huán)。

除以上污染源外，配液消毒問題、操作問題也是污染原因之一。關(guān)于培養(yǎng)基的無(wú)菌狀況，取培養(yǎng)基至培養(yǎng)瓶中（不加細(xì)胞），37度試培養(yǎng)一段時(shí)間后觀察。如果沒有細(xì)菌生長(zhǎng)就是操作及細(xì)胞培養(yǎng)箱環(huán)境的問題。