各培養(yǎng)基適用性檢查的具體操作過程

1 膽鹽乳糖培養(yǎng)基

新鮮配制100mL/瓶的對照膽鹽乳糖培養(yǎng)基4瓶，121℃滅菌15min，備用。分別接種大腸埃希菌、銅綠假單胞菌以及金黃色葡萄球菌各1瓶，接種菌液量1mL(不大于100CFU),另一瓶不接種菌作為空白對照；被檢培養(yǎng)基同法操作，置規(guī)定溫度培養(yǎng)。培養(yǎng)18h,與對照培養(yǎng)基比較，被檢培養(yǎng)基中試驗(yàn)菌應(yīng)生長良好，表現(xiàn)為液體培養(yǎng)基變渾濁；培養(yǎng)48h，空白培養(yǎng)瓶和接種金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)瓶應(yīng)不得渾濁；

2 MUG培養(yǎng)基

新鮮配制50mL/瓶的對照MUG培養(yǎng)基4瓶，121℃滅菌15min,備用。接種大腸埃希菌2支，接種菌液0.2mL(不大于100CFU)，另一支不接種菌作為空白對照，培養(yǎng)5h，在366nm紫外光燈下觀察結(jié)果；被檢培養(yǎng)基同法操作，置規(guī)定溫度培養(yǎng)?？瞻着囵B(yǎng)基應(yīng)不得渾濁，且366nm處觀察無熒光；與對照培養(yǎng)基比較，被檢培養(yǎng)基中試驗(yàn)菌應(yīng)生長良好，表現(xiàn)為液體培養(yǎng)基變渾濁，366nm處應(yīng)呈熒光。若熒光不明顯，則可延長至24h觀察。

3 曙紅亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基（EMB）

新鮮配制對照EMB瓊脂培養(yǎng)基，121℃滅菌15min,冷卻至60℃傾注平皿，35℃培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)8h后備用。取5個(gè)無菌EMB瓊脂平板，分別涂布接種大腸埃希菌和乙型副傷寒沙門菌各2皿，接種菌液0.1mL（含菌50~100CFU），另一平板不接種菌作為空白對照，涂布均勻后于規(guī)定溫度倒置培養(yǎng)；被檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)18h，被檢培養(yǎng)基菌落大小、形態(tài)特征及顏色應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致；培養(yǎng)24h，空白平板應(yīng)無菌落生長。

4 麥康凱瓊脂培養(yǎng)基

新鮮配制對照麥康凱瓊脂培養(yǎng)基121℃滅菌15min,冷卻至60℃傾注平皿，35℃培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)8h后備用。取5個(gè)無菌麥康凱瓊脂平板，分別涂布接種大腸埃希菌和乙型副傷寒沙門菌各5皿，接種菌液0.1mL（含菌50~100CFU），另一平板不接種菌作為空白對照，涂布均勻后于規(guī)定溫度倒置培養(yǎng)；被檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)18h，被檢培養(yǎng)基菌落大小、形態(tài)特征及顏色應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致；培養(yǎng)24h，空白平板應(yīng)無菌落生長。

5 乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基

新鮮配制10mL/支的對照乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基，121℃滅菌15min，備用。取5支，分別接種大腸埃希菌和金黃色葡萄球菌，各2支，接種菌液量1mL(不大于100CFU)，另一支不接種菌作為空白對照；被檢培養(yǎng)基同法操作，置規(guī)定溫度培養(yǎng)。培養(yǎng)18h,與對照培養(yǎng)基比較，被檢培養(yǎng)基中試驗(yàn)菌應(yīng)生長良好，表現(xiàn)為液體培養(yǎng)基變色、渾濁，且有導(dǎo)管中應(yīng)有明顯的產(chǎn)氣現(xiàn)象；培養(yǎng)24h，空白培養(yǎng)管和接種金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)管應(yīng)不得變色、不得渾濁。

6 乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基

新鮮配制10mL/支的對照乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基，121℃滅菌15min，備用。取3支，接種大腸埃希菌2支，接種菌液量1mL(不大于100CFU)，另一支不接種菌作為空白對照；被檢培養(yǎng)基同法操作，置規(guī)定溫度培養(yǎng)。培養(yǎng)18h,與對照培養(yǎng)基比較，被檢培養(yǎng)基中試驗(yàn)菌應(yīng)生長良好，表現(xiàn)為液體培養(yǎng)基變色、渾濁，且有導(dǎo)管中應(yīng)有明顯的產(chǎn)氣現(xiàn)象；培養(yǎng)24h，空白培養(yǎng)管應(yīng)不得變色、不得渾濁。

7 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基

新鮮配制100mL/瓶的對照營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基3瓶，121℃滅菌15min，備用。分別接種乙型副傷寒沙門菌和金黃色葡萄球菌各1瓶，接種菌液量1mL(不大于100CFU)，另一瓶不接種菌作為空白對照；被檢培養(yǎng)基同法操作，置規(guī)定溫度培養(yǎng)。培養(yǎng)18h,與對照培養(yǎng)基比較，被檢培養(yǎng)基中試驗(yàn)菌應(yīng)生長良好，表現(xiàn)為液體培養(yǎng)基變渾濁；培養(yǎng)48h，空白培養(yǎng)瓶應(yīng)不得渾濁。

8 四硫磺酸鈉亮綠培養(yǎng)基（TTB）

新鮮配制10mL/支的對照四硫磺酸鈉亮綠培養(yǎng)基基礎(chǔ)，121℃滅菌15min，備用。臨用前，無菌操作加入0.2ml碘試液和0.1mL亮綠試液。取5支，分別接種乙型副傷寒沙門菌和金黃色葡萄球菌各2支，接種菌液1mL(不大于100CFU)，另一支不接種菌作為空白對照；被檢培養(yǎng)基同法操作，置規(guī)定溫度培養(yǎng)。培養(yǎng)18h,與對照培養(yǎng)基比較，被檢培養(yǎng)基中試驗(yàn)菌應(yīng)生長良好，表現(xiàn)為液體培養(yǎng)基上清渾濁；培養(yǎng)24h，空白培養(yǎng)管和接種金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)管應(yīng)不得渾濁。

由于TTB中的碳酸鈣對渾濁現(xiàn)象觀察有影響，因此若渾濁現(xiàn)象不明顯，則將各培養(yǎng)物接種至膽鹽硫乳瓊脂（DHL）或沙門、志賀屬瓊脂（SS）平板上劃線觀察TTB培養(yǎng)物生長情況，空白對照和接種金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)管劃線后應(yīng)無菌落生長，對照和被檢TTB培養(yǎng)基劃線接種至瓊脂平板后應(yīng)有菌落生長、且顏色形態(tài)一致。

9 膽鹽硫乳瓊脂培養(yǎng)基（DHL）

新鮮配制對照DHL瓊脂培養(yǎng)基，加熱充分溶解，冷卻至60℃傾注平皿，35℃培養(yǎng)箱預(yù)培8h后備用。取3個(gè)無菌DHL瓊脂平板，涂布接種乙型副傷寒沙門菌2皿，接種菌液0.1mL（含菌50~100CFU），另一平板不接種菌作為空白對照，涂布均勻后于規(guī)定溫度倒置培養(yǎng)；被檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)18h，被檢培養(yǎng)基菌落大小、形態(tài)特征及顏色應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致；培養(yǎng)48h，空白平板應(yīng)無菌落生長。

10 沙門、志賀屬瓊脂培養(yǎng)基（SS）

新鮮配制對照SS 瓊脂培養(yǎng)基，加熱充分溶解，冷卻至60℃傾注平皿，35℃培養(yǎng)箱預(yù)培8h后備用。取3個(gè)無菌SS 瓊脂平板，涂布接種乙型副傷寒沙門菌2皿，接種菌液0.1mL（含菌50~100CFU），另一平板不接種菌作為空白對照，涂布均勻后于規(guī)定溫度倒置培養(yǎng)；被檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)18h，被檢培養(yǎng)基菌落大小、形態(tài)特征及顏色應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致；培養(yǎng)48h，空白平板應(yīng)無菌落生長。

11 溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)

新鮮配制對照溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基，121℃滅菌15min,冷卻至60℃傾注平皿，35℃培養(yǎng)箱預(yù)培8h后備用。取7個(gè)無菌瓊脂平板，分別涂布接種銅綠假單胞菌和大腸埃希菌各3皿，接種菌液0.1mL（含菌50~100CFU），另一平板不接種菌作為空白對照，涂布均勻后于規(guī)定溫度倒置培養(yǎng)；被檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)18h，被檢培養(yǎng)基菌落大小、形態(tài)特征及顏色應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致；培養(yǎng)24h，空白平板和接種大腸埃希菌的平板應(yīng)無菌落生長。

12 綠膿菌素測定用培養(yǎng)基（PDP）

新鮮配制對照綠膿菌素測定用培養(yǎng)基基礎(chǔ)，每升培養(yǎng)基中加入10mL甘油，121℃滅菌15min,冷卻至60℃傾注平皿，35℃培養(yǎng)箱預(yù)培8h后備用。取3個(gè)無菌綠膿菌素測定用瓊脂平板，涂布接種銅綠假單胞菌2皿，接種菌液0.1ml（含菌50~100CFU），另一平板不接種菌作為空白對照，涂布均勻后于規(guī)定溫度倒置培養(yǎng)24h；被檢培養(yǎng)基同法操作。空白平板應(yīng)無菌落生長，被檢培養(yǎng)基菌落大小、形態(tài)特征及顏色應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致。

13 亞碲酸鹽肉湯培養(yǎng)基

新鮮配制100mL/瓶的對照營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基3瓶，121℃滅菌15min，備用。臨用前，加入新鮮配制的無菌1%亞碲酸鹽0.2mL。分別接種金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌各1瓶，接種菌液1ml(不大于100CFU)，另一瓶不接種菌株作為空白對照；被檢培養(yǎng)基同法操作，置規(guī)定溫度培養(yǎng)。培養(yǎng)18h,與對照培養(yǎng)基比較，被檢培養(yǎng)基中試驗(yàn)菌應(yīng)生長良好，表現(xiàn)為液體培養(yǎng)基變黑、變渾濁；培養(yǎng)48h，空白培養(yǎng)瓶和接種大腸埃希菌的培養(yǎng)瓶應(yīng)不得渾濁。

14 卵黃氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基

新鮮配制對照卵黃氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)，121℃滅菌15min,冷卻至60℃，參照2020版《中國藥典》比例無菌操作加入10%氯化鈉卵黃液，充分振搖后傾注平皿，35℃培養(yǎng)箱預(yù)培8h后備用。取5個(gè)無菌瓊脂平板，分別涂布接金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌各2皿，接種菌液0.1ml（含菌50~100CFU），另一平板不接種菌作為空白對照，涂布均勻后于規(guī)定溫度倒置；被檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)24h，被檢培養(yǎng)基菌落大小、形態(tài)特征及顏色應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致；培養(yǎng)72h，空白平板和接種大腸埃希菌的平板應(yīng)無菌落生長。

15 甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基

新鮮配制對照甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基，121℃滅菌15min,冷卻至60℃傾注平皿，35℃培養(yǎng)箱預(yù)培8h后備用。取5個(gè)無菌瓊脂平板，分別涂布接種金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌各2皿，接種菌液0.1mL（含菌50~100CFU），另一平板不接種菌作為空白對照，涂布均勻后于規(guī)定溫度倒置；被檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)24h，被檢培養(yǎng)基菌落大小、形態(tài)特征及顏色應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致；培養(yǎng)72h，空白平板和接種大腸埃希菌的平板應(yīng)無菌落生長。

16 梭菌增菌培養(yǎng)基

新鮮配制100mL/瓶的對照梭菌增菌培養(yǎng)基2瓶，121℃滅菌15min，備用。接種生孢梭菌1瓶，接種菌液1mL(不大于100CFU)，另一瓶不接種菌株作為空白對照，置規(guī)定溫度的厭氧條件培養(yǎng)48h；被檢培養(yǎng)基同法操作。空白培養(yǎng)瓶應(yīng)不得渾濁；與對照培養(yǎng)基比較，被檢培養(yǎng)基中試驗(yàn)菌應(yīng)生長良好，表現(xiàn)為液體培養(yǎng)基變渾濁。

17 哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基

新鮮配制對照哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基，121℃滅菌15min,冷卻至60℃傾注平皿，35℃培養(yǎng)箱預(yù)培8h后備用。取3個(gè)哥倫比亞瓊脂平板，涂布接種生孢梭菌2皿，接種菌液0.1mL（含菌50~100CFU），另一平板不接種菌作為空白對照，涂布均勻后置規(guī)定溫度的厭氧條件下倒置培養(yǎng)；被檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)48h，空白平板無菌落生長；被檢培養(yǎng)基菌落大小、形態(tài)特征應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致。

哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基營養(yǎng)豐富，適宜多數(shù)需氧菌的生長，為了消除其它雜菌生長對檢查結(jié)果的影響，可在每升滅菌后培養(yǎng)基中按無菌操作添加含有相當(dāng)于20mg慶大霉素的硫酸慶大霉素。添加慶大霉素的哥倫比亞瓊脂可參照上述方法進(jìn)行培養(yǎng)基適用性考察。

18 沙氏葡萄糖肉湯培養(yǎng)基

新鮮配制100mL/瓶的對照沙氏葡萄糖肉湯培養(yǎng)基2瓶，121℃滅菌15min，備用。接種白色念球菌1瓶，接種菌液量1mL(不大于100CFU)，另一瓶不接種菌作為空白對照；被檢培養(yǎng)基同法操作，置規(guī)定溫度培養(yǎng)。培養(yǎng)48h,與對照培養(yǎng)基比較，被檢培養(yǎng)基中試驗(yàn)菌應(yīng)生長良好，表現(xiàn)為液體培養(yǎng)基變渾濁；培養(yǎng)72h，空白培養(yǎng)瓶應(yīng)不得渾濁。

19 沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基

新鮮配制對照沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，121℃滅菌15min,冷卻至60℃傾注平皿，35℃培養(yǎng)箱預(yù)培8h后備用。取3個(gè)沙氏葡萄糖瓊脂平板，涂布接種白色念球菌2皿，接種菌液0.1mL（含菌50~100CFU），另一平板不接種菌作為空白對照，涂布均勻后于規(guī)定溫度倒置培養(yǎng)；被檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)24h，被檢培養(yǎng)基上的菌落大小、形態(tài)特征、顏色及氣味應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致；培養(yǎng)72h，空白平板應(yīng)無菌落生長。

20 念球菌顯色培養(yǎng)基

新鮮配制對照念球菌顯色培養(yǎng)基，加熱充分溶解，冷卻至60℃傾注平皿，35℃培養(yǎng)箱預(yù)培8h后備用。念球菌顯色平板使用前避光保存，取5個(gè)無菌念球菌顯色平板，分別涂布接種白色念球菌和大腸埃希菌各2皿，接種菌液0.1mL（含菌50~100CFU），另一平板不接種菌作為空白對照，涂布均勻后于規(guī)定溫度倒置培養(yǎng)；被檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)24h，被檢培養(yǎng)基菌落大小、形態(tài)特征及顏色應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致；培養(yǎng)72h，空白平板和接種大腸埃希菌的平板應(yīng)無菌落生長。

21 1%聚山梨酯80-玉米瓊脂培養(yǎng)基

新鮮配制對照1%聚山梨酯80-玉米瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)，每升培養(yǎng)基中加入10mL聚山梨酯80，121℃滅菌15min,冷卻至60℃后，傾注平皿， 35℃培養(yǎng)箱預(yù)培8h后備用。取3個(gè)1%聚山梨酯80-玉米瓊脂平板，涂布接種白色念球菌2皿，接種菌液0.1mL（含菌50~100CFU），另一平板不接種菌作為空白對照，涂布均勻后于規(guī)定溫度倒置培養(yǎng)；被檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)24h，被檢培養(yǎng)基菌落大小、形態(tài)特征及芽管指示能力應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致；培養(yǎng)48h，空白平板應(yīng)無菌落生長。