瓊脂糖的凝膠性能與電泳原理

瓊脂糖的凝膠性能介紹

瓊脂糖在水中一般加熱到90℃以上溶解，溫度下降到35-40℃時形成良好的半固體狀的凝膠，這是它具有多種用途的主要特征和基礎。瓊脂糖凝膠性能通常用凝膠強度表示。強度越高，凝膠性能越好。質(zhì)量較好的瓊脂糖強度通常在1200克/cm2以上（1%膠濃度）。瓊脂糖的凝膠性是由存在的氫鍵所致，凡是能破壞氫鍵的因素都能導致凝膠性的破壞。瓊脂糖具有親水性，并幾乎完全不存在帶電基團，對敏感的生物大分子極少引起變性和吸附，是理想的惰性載體。在瓊脂糖制備過程中需要把瓊脂果膠盡量去除，否則瓊脂糖有可能存在極微量硫酸根和丙酮酸取代電離基團，就會造成電內(nèi)滲（EEO），電內(nèi)滲對質(zhì)點的移動產(chǎn)生影響。質(zhì)量較好的瓊脂糖硫酸根含量比較低，通常在0.2%以下，電內(nèi)滲比較小，通常在0.13以下。這也就是瓊脂糖比瓊脂貴那么多的原因了。

1937年荒木第一次從瓊脂中分離出瓊脂糖，但直到1961年Hjertin首先發(fā)現(xiàn)了瓊脂糖優(yōu)異的使用性能后才引起了越來越多的關注，并開始工業(yè)生產(chǎn)。瓊脂糖廣泛應用于臨床化驗、生化分析和生物大分子物質(zhì)的分離等領域。
瓊脂糖凝膠電泳的原理

瓊脂糖凝膠電泳是以瓊脂糖為介質(zhì)，對不同大小的DNA 或 RNA 實現(xiàn)分離的一種電泳方法。瓊脂糖是一種多糖，具有親水性，但是不帶電荷。

使得 DNA 在堿性條件下使其帶負電荷（pH8.0 的緩沖液），在電流作用下，以瓊脂糖凝膠為介質(zhì)，由負極向正極移動，根據(jù)不同的 DNA 分子片段的大小和形狀不同，在電場中泳動的速率也不相同，同時在樣品中加入染料能夠和DNA 分子間形成絡合物，經(jīng)過紫外照射，可以看到 DNA 的位置，從而達到分離、鑒定的目的。

瓊脂糖凝膠電泳注意事項

底板一定要用膠帶封緊，否則灌膠時凝膠會漏出。可以在灌膠時先倒少量凝膠在交界處，利用凝固的凝膠將其封緊。

梳子一定不能插到底部，應距離底部1-2mm，否則拔梳子時容易弄破凝膠，導致漏膠，加熱時應注意不要讓瓊脂糖沸騰得太厲害，稍稍沸騰至溶液清涼，即其全部溶解即可，過度沸騰會導致凝膠實際濃度的提高。

將凝膠放入電泳槽時要注意極性，不要正負極顛倒。要注意撕去兩端的封帶，凝膠的濃度與待分離的DNA的大小有關。一般濃度為1%，低濃度的膠特別易碎，要注意。