關(guān)于血清學(xué)試驗(yàn)方法及注意事項(xiàng)

血清學(xué)試驗(yàn)是抗原抗體在體外出現(xiàn)可見(jiàn)反應(yīng)的總稱(chēng)，故又稱(chēng)抗原抗體反應(yīng)。它可以用已知抗體(細(xì)菌抗血清)檢測(cè)未知抗原(待檢細(xì)菌) ，也可用已知抗原(已知病原菌)檢測(cè)患者血清中的相應(yīng)細(xì)菌抗體及其效價(jià)，是臨/床診斷、實(shí)驗(yàn)室研究和細(xì)菌學(xué)鑒定的重要手段之一。 一、玻片法

1、原理：用已知的診斷血清或血漿在玻片上與待檢菌及生理鹽水混合，若出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的特異性凝集塊，表示該菌即為相應(yīng)的細(xì)菌。

2、方法：取一潔凈載玻片，用接種環(huán)取待檢菌培養(yǎng)物，分別與診斷血清及生理鹽水混勻，上下?lián)u動(dòng)玻片數(shù)次， 1~3 min 后觀察結(jié)果。

3、結(jié)果判斷：陽(yáng)性——待檢菌明顯凝集，對(duì)照菌均勻混濁。陰性——待檢菌及對(duì)照菌均勻混濁。自凝——測(cè)定菌、對(duì)照菌均凝集(圖3 -46) 。

4、注意事項(xiàng)：某些細(xì)菌菌體表面常有一層表面抗原，如傷寒沙門(mén)菌的Vi 抗原及志賀菌屬的K 抗原等。它能阻抑菌體抗原與抗血清的凝集，從而導(dǎo)致假陰性結(jié)果。此時(shí)應(yīng)將菌懸液于1000C 中煮沸1 h ，以破壞其表面抗原，然后再作試驗(yàn)。

二、試管法

1、原理：此法可排除玻片法凝集試驗(yàn)的非特異性凝集，是一種半定量凝集試驗(yàn)。

2、方法：取小試管1 0 支，第1 管加入生理鹽水0.45 時(shí)，再加入0. 05 ml 診斷血清混勻，其余各管均加生理鹽水0 . 25 ml ，然后從第1 管中吸出0.25 ml 加入第2 管中，棍勻后再吸出0.25 ml 加入第3 管，依次類(lèi)推直至第9 管，從第9 管吸出0 . 25 ml 棄去，第10 管不加抗血清為對(duì)照管。每管加待檢菌菌液(10 X 109 CFU/ ml)0 . 25ml 時(shí)，充分振蕩混勻后，置37℃水浴4 h ， 再置4℃中過(guò)夜。

3、結(jié)果判斷：以血清最高稀釋度達(dá)到(++)凝集者(管內(nèi)液體澄清，部分凝集塊沉于管底)為該菌的凝集效價(jià)。若此效價(jià)達(dá)所用原診斷血清效價(jià)一半以上者為陽(yáng)性。

4、注意事項(xiàng)：腦膜炎奈瑟菌的菌液必須經(jīng)56℃ 30 min 滅活，以破壞自溶酶。若試驗(yàn)出現(xiàn)低凝集結(jié)果時(shí)，應(yīng)將該菌傳代數(shù)次后，再做實(shí)驗(yàn)。