幾種血涂片染色方法的比較

血涂片染色廣泛應(yīng)用于醫(yī)學檢驗和組織學教學片的制作。傳統(tǒng)的染色方法有Wright氏、Giemsa氏和Wright Giemsa混合法，作為醫(yī)學檢驗以簡單快捷為首選，而要制作教學標本，則對染色效果、標本存放時間要求更高，對此，我們對各種染色方法進行了長期的探索和比較，以期找到較穩(wěn)定的、效果滿意的染色方法用于制作大批量教學標本。
1  材料與方法

1.1  采集標本  用消毒采血針頭扎刺手指頭或耳垂，滴取黃豆大小血滴于潔凈載玻片上，推成均勻血膜，自然晾干，用甲醇固定2 min~5 min。大量制作教學標本可一次推出所需血膜，固定待用。

1.2  染色

1.2.1  Giemsa氏染色法  將Giemsa原液(配制1年后)分別與pH 6.4、6.6、6.7、6.8的磷酸鹽緩沖液按1∶10的比例配成工作液；將固定好的血片分別滴染以上4種工作液，每種染液又分別染25 min、30 min、45 min、60 min，自來水沖洗、鏡檢。

1.2.2  Wright氏染色法  染液按傳統(tǒng)方法預先配好，我們使用配制1個月后的Wright氏染液，用前用pH 7的磷酸鹽緩沖液稀釋1倍，分別染5 min、10 min、15 min，然后用自來水沖洗干凈、鏡檢。

1.2.3  Wright-Giemsa混合法  取Giemsa原液1份、Wright氏原液5份、pH 6.7的磷酸鹽緩沖液6份配成染液，滴染10 min、15 min、20 min，然后用自來水沖洗干凈、鏡檢。

2  結(jié)果

2.1  Giemsa滴染  用pH 6.7的磷酸鹽緩沖液配制的工作液染色45 min的血片，紅細胞呈桔紅色，白細胞核呈紫藍色，中性顆粒淺紅色，嗜酸性顆粒桔紅色，淋巴細胞胞質(zhì)淺藍色，單核細胞胞質(zhì)灰藍色，血小板紫藍色。而pH＜6.7和染色時間較短者，則核染色偏紅或難著色，pH＞6.7則核呈藍色，嗜酸性顆粒顏色偏暗。

2.2  Wright氏染液滴染  染色15 min，細胞核和血小板紫紅色，其他結(jié)果與Giemsa滴染相似，染色時間過短則核難著色，時間過長，則易使染液揮發(fā)而造成污染。

2.3  Wright-Giemsa混合染色  細胞核呈紫藍色，紅細胞紫紅色，其他結(jié)果與Wright氏滴染相似。

3  比較與討論

三種染色法均為傳統(tǒng)染色法，各有優(yōu)缺點：Giemsa氏染色法，染色過程易控制、不污染是其最大的優(yōu)點，染色效果對染液pH值要求高，經(jīng)過反復多次試驗，以pH 6.7染色效果最好，各種細胞的特性顯示清楚，但染色時間長是其缺點，故此法較適于制作教學標本用；Wright氏染色法的優(yōu)點是染色時間短，結(jié)果出現(xiàn)快，較適于臨床檢驗，但其染色過程不易掌握、易污染是其缺點；WrightGiemsa混合法雖能對兩種染法起互補作用，但染液變性快、易污染，也不適于教學標本染色。

4  體會

各種涂片染色后，不要傾去染液，否則易使染液沉淀在片上；直接用自來水沖洗比用蒸餾水或緩沖液沖洗更方便、徹底，可通過調(diào)大水壓及時沖去結(jié)合尚未牢固的染料沉渣。