標(biāo)準(zhǔn)菌株的應(yīng)用以及管理的相關(guān)流程

一、標(biāo)準(zhǔn)菌株的概念及其應(yīng)用

1.1標(biāo)準(zhǔn)菌株概念

1）GB/T 27405-2008

實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品微生物檢測(cè)：

①標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)物：標(biāo)準(zhǔn)菌株、標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株和工作菌株的統(tǒng)稱。

②標(biāo)準(zhǔn)菌株：至少定義至屬或種水平的菌株。按其特征進(jìn)行分類和描述，有明確的來(lái)源。

③標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株：標(biāo)準(zhǔn)菌株經(jīng)過(guò)一代轉(zhuǎn)接后獲得的同種菌株。

④工作菌株：由標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備轉(zhuǎn)接后獲得的同種菌株。

1.2標(biāo)準(zhǔn)菌株的應(yīng)用：

各種國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)、國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)等的相關(guān)微生物檢測(cè)，用于驗(yàn)收培養(yǎng)基(包括試劑盒)、驗(yàn)證方法和評(píng)估實(shí)驗(yàn)操作。

二、微生物菌種管理的相關(guān)流程

2.1菌株的采集：

實(shí)驗(yàn)室用菌種一是到國(guó)家法定機(jī)構(gòu)采購(gòu)，二是購(gòu)買(mǎi)ATCC菌種，三是科研中菌種交流。不管是哪種來(lái)源，均統(tǒng)一采集。采集中嚴(yán)格按照規(guī)范執(zhí)行。要求包裝可靠，采集迅速，不泄漏不污染。保證菌種合格和環(huán)境安全。采集中要有菌種傳代標(biāo)識(shí)。選擇有資質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)菌株的合格供應(yīng)商，每批標(biāo)準(zhǔn)菌株必須附帶有供應(yīng)商的合格證或檢測(cè)報(bào)告或說(shuō)明書(shū)，來(lái)證明所采購(gòu)的標(biāo)準(zhǔn)菌株是合格的。

2.2標(biāo)準(zhǔn)菌株和驗(yàn)收

實(shí)驗(yàn)室收到標(biāo)準(zhǔn)菌株，首先應(yīng)進(jìn)行符合性感官檢查，記錄菌株號(hào)和標(biāo)準(zhǔn)菌株來(lái)源途徑信息，確保溯源性清楚。同時(shí)還應(yīng)記錄標(biāo)準(zhǔn)菌株名稱和數(shù)量、生產(chǎn)日期、接收日期和有無(wú)破損等情況。

2.3凍干標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)活

2..3.1開(kāi)啟產(chǎn)品包裝：先用70%酒精棉擦拭外包裝，從凹口處撕開(kāi)產(chǎn)品外包裝，撕掉標(biāo)簽上的拉片，將其貼于菌株接收、保存記錄序號(hào)前面。

2.3.2復(fù)活：選擇合適的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件（根據(jù)生產(chǎn)商說(shuō)明或有關(guān)技術(shù)通則見(jiàn)附錄）進(jìn)行復(fù)活。菌種的首次活化最好是在非選擇性瓊脂培養(yǎng)基上，除非特殊情況或特別推薦，一般不用液體培養(yǎng)基。凍干菌株的傳代次數(shù)不得超過(guò)5代，從標(biāo)準(zhǔn)菌株保藏中心購(gòu)買(mǎi)的凍干標(biāo)準(zhǔn)菌株為第F0代。

捏管帽處安瓿瓶（僅一次）使其釋放水合液體。垂直握住安瓿瓶并輕拍之，使液體流入含小球的管底。通過(guò)擠捏壓碎小球使其與液體混合，立即將拭子浸于水合液體。擠壓并旋轉(zhuǎn)拭子，接種于初級(jí)培養(yǎng)平板，接種圈的直徑約為25mm，用一無(wú)菌接種環(huán)在先前接種區(qū)域劃線10-20次，促使分離出單菌落。同時(shí)吸出部分菌液接種胰蛋白胨大豆肉湯管，副溶血性弧菌接種3%氯化鈉菌胰蛋白胨大豆肉湯管。將接種好的平板和管立即進(jìn)行培養(yǎng)。細(xì)菌培養(yǎng)溫度通常為25℃或37℃。多數(shù)凍干菌株會(huì)在幾天后長(zhǎng)出，但是少數(shù)菌會(huì)表現(xiàn)出延滯期延長(zhǎng)的現(xiàn)象，需要將正常培養(yǎng)時(shí)間加倍。復(fù)活后的菌株為F1代。