核糖核酸酶A(RNase A)的主要用途介紹

核糖核酸酶A（RNase A）來源于牛胰臟，是一種內切核糖核酸酶，可特異攻擊RNA上嘧啶殘基的3’端，切割胞嘧啶或尿嘧啶與相鄰核苷酸形成的磷酸二酯鍵，反應終產物是3’嘧啶核苷酸和末端帶3’嘧啶核苷酸的寡核苷酸。無輔助因子及二價陽離子存在時，核糖核酸酶A的作用可以被胎盤RNA酶抑制劑（RNasin）或氧釩一核糖核苷復合物（vanadyl—ribonuclosidecomplex，VRC）所抑制。RNase A的反應條件極廣，且極難失活。在低鹽濃度（0～100 mmol/l NaCl）下，RNase A切割單鏈和雙鏈RNA、DNA：RNA雜交體中的RNA；當NaCl濃度為300 mmol/l?；蚋邥r，RNase A就特異性切割單鏈RNA。去除反應液中的RNase A，通常需要蛋白酶K處理、酚反復抽提和乙醇沉淀。 在分子克隆中，核糖核酸酶A的主要用途為：

①從DNA：RNA雜交體中去除未雜交的RNA區(qū)。

②確定RNA或DNA中的單堿基突變的位置。在RNA：DNA或RNA：RNA雜交體中，若存在單堿基錯配，可用RNAse A識別并切割。通過凝膠電泳分析切割產物的大小，即可確定錯配的位囂。

③RNA檢測。RNA酶保護分析法（RNase protection assay）是近年來發(fā)展起來的一種檢測RNA的雜交技術。其基本原理是利用單鏈RNA探針，與待測的RNA樣品進行雜交形成RNA：RNA雙鏈分子，由于RNA酶可專一性地降解未雜交的單鏈RNA，而雙鏈受到保護不被降解，經凝膠電泳可以確定目的RNA的長度。該方法靈敏度較Northern雜交法更高，并可進行較為準確的定量。選擇適當?shù)奶结?，還可進行基因轉錄起始位點分析及內含子（也稱內元）剪切位點分析等研究。此法的靈敏度比核酸酶S1保護分析法高數(shù)倍。

④降解DNA制備物中的RNA分子。須使用無DNAsd的RNase（DNase I free RNase），市售的一般RNase A常含有DNase，可在100 retool/I Tris—CI（pH 7．5）和15 mmol/l。NaCI溶液中100℃加熱15 min，以去除之。