引物定量不準(zhǔn)是怎么回事？

引物定量不準(zhǔn)，出現(xiàn)這種情況的可能性有：

（1）定量錯(cuò)誤、分裝錯(cuò)誤、引物抽干或收樣過(guò)程中意外丟失。這種可能性有，但是很少，因?yàn)樽鳛閷I(yè)的引物合成公司，生產(chǎn)人員都是經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的專業(yè)培訓(xùn)，這種錯(cuò)誤是要求謹(jǐn)慎避免甚至杜絕的。一般情況下，引物都有留樣備份，接到用戶投訴后，都會(huì)找出留樣重新定量，一般都沒(méi)有問(wèn)題，如確實(shí)存在問(wèn)題，則可安排重新準(zhǔn)備一份。

（2）系統(tǒng)誤差，我們認(rèn)為10%左右為允許誤差。使用過(guò)程中，引物工作濃度范圍很寬，定量上的少許偏差不影響實(shí)驗(yàn)。

（3）用戶收到引物干粉時(shí)，打開(kāi)引物管蓋前沒(méi)有離心或其他誤操作導(dǎo)致引物干粉部分丟失。

（4）用戶沒(méi)有能夠正確理解引物OD數(shù)的含義，沒(méi)有能夠正確使用分光光度計(jì)，特別是使用微量測(cè)定；用戶沒(méi)有將OD讀數(shù)，正確地轉(zhuǎn)換成母液中OD數(shù)。這種情況比較常見(jiàn)。

例如，驗(yàn)證標(biāo)2OD引物量是否準(zhǔn)確，簡(jiǎn)單的做法是：加入1ml水，徹底溶解混勻后，取100ul,加入900ul水，用光徑為1cm的石英比色杯，波長(zhǎng)260nm,此時(shí)光吸收的讀數(shù)為0.2。