菌落總數(shù)測(cè)定菌落計(jì)數(shù)需注意的事項(xiàng)

(1)如果稀釋度大的平板上菌落數(shù)反比稀釋度小的平板上菌落數(shù)高，則系檢驗(yàn)工作中發(fā)生的差錯(cuò)，屬實(shí)驗(yàn)室事故。此外，也可能因抑菌劑混入樣品中所致，均不可用作檢樣計(jì)數(shù)報(bào)告的依據(jù)。 (2)如果平板上出現(xiàn)鏈狀菌落，菌落之間沒(méi)有明顯的界限，這是在瓊脂與檢樣混合時(shí)，一個(gè)細(xì)菌塊被分散所造成。一條鏈作為一個(gè)菌落計(jì)，如有來(lái)源不同的幾條鏈，每條鏈作為一個(gè)菌落計(jì)，不要把鏈上生長(zhǎng)的各個(gè)菌落分開(kāi)來(lái)數(shù)。此外，如皿內(nèi)瓊脂凝固后未及時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)而遭受昆蟲(chóng)侵入，在昆蟲(chóng)爬過(guò)的地方也會(huì)出現(xiàn)鏈狀菌落，也不應(yīng)分開(kāi)來(lái)數(shù)。

(3)如果所有平板上都有菌落密布，不要用多不可計(jì)作報(bào)告，而應(yīng)在稀釋度最大的平板上，任意數(shù)其中2cm2個(gè)，除2求出每cm2內(nèi)平均菌落數(shù)乘以皿底面積63.6cm2數(shù)，再乘其稀釋倍數(shù)作報(bào)告。例如10-1～10-3稀釋度的所有平板上均菌落密布，而在lO-3稀釋的平板上任數(shù)2個(gè)cm2。內(nèi)的菌落數(shù)是60個(gè)，皿底直徑為9cm，則該檢樣每g(或m1)中“估計(jì)”菌落數(shù)為：60／2×63．6×1000=1908000或1.9×106。

63.6cm2數(shù)系按皿底直徑為9cm時(shí)計(jì)算而得，即：(9／2)2×3．14=63．6；如所用平皿的皿底直徑不是9cm，則可按其直徑的實(shí)際cm數(shù)代人圓面積公式求出。

(4)菌落計(jì)數(shù)中，如能使用菌落計(jì)數(shù)器，則比較方便，燈光由側(cè)面射向平板，菌落易于觀察。由于儀器帶有電子音響訊號(hào)，用特制金屬探筆點(diǎn)數(shù)中，在發(fā)出音響之下始顯示數(shù)字增加，不會(huì)發(fā)生差錯(cuò)。且燈光與平板之間夾有多用方格玻質(zhì)規(guī)板(方格面積為lcm2)，也有助于對(duì)菌落密布的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。

(5)檢樣如系微生物類(lèi)制劑(如酸牛乳、酵母制酸性飲料)，則平板計(jì)數(shù)中應(yīng)相應(yīng)地將有關(guān)微生物(乳酸桿菌、酵母菌)排除，不可并入檢樣的菌落總數(shù)內(nèi)作報(bào)告。一般在校正檢樣的pH7．6后，再進(jìn)行稀釋和培養(yǎng)，此類(lèi)嗜酸性微生物往往即不易生長(zhǎng)。并可用革蘭氏法染色鑒別。染色鑒別時(shí)，要用不校正pH的檢樣做成相同稀釋度的稀釋液培養(yǎng)所生成的菌落涂片染色作對(duì)照，以資辨別。酵母菌卵圓形，遠(yuǎn)比細(xì)菌大，大小為2～5×5～30μm，革蘭氏陽(yáng)性著色。乳酸桿菌在24小時(shí)內(nèi)，于普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上在有氧條件下培養(yǎng)，通常是不生長(zhǎng)的。