Flag標(biāo)簽蛋白檢測(cè)抗體實(shí)驗(yàn)應(yīng)用說(shuō)明

Flag標(biāo)簽蛋白檢測(cè)抗體

遠(yuǎn)慕生物提供可用于WB，IF，IP應(yīng)用的Flag抗體，特異性檢測(cè)Flag標(biāo)簽融合蛋白，F(xiàn)lag標(biāo)簽抗體可識(shí)別在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的Flag標(biāo)記重組蛋白，包括Flag位于氨基末端、中段以及羧基末端的重組蛋白。

Flag標(biāo)簽系統(tǒng)利用一個(gè)短的親水性八氨基酸肽（ DYKDDDDK）融合到目標(biāo)蛋白。Flag標(biāo)簽可位于蛋白質(zhì)的C端或N端，該系統(tǒng)已廣泛應(yīng)用于細(xì)菌、酵母和哺乳動(dòng)物細(xì)胞等多種細(xì)胞類型，相應(yīng)的Flag標(biāo)簽抗體也被廣泛應(yīng)用。由于Flag標(biāo)簽系統(tǒng)的純化條件是非變性的，因此可以純化所有有活性的融合蛋白。Flag標(biāo)簽可以通過(guò)加入腸激酶處理去除，腸激酶專一識(shí)別該肽序列C末端的5個(gè)氨基酸殘基。Flag抗體可以用于檢測(cè)和Flag標(biāo)簽融合表達(dá)蛋白的表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)定位，以及純化、定性或定量檢測(cè)Flag融合表達(dá)蛋白等。

由于Flag標(biāo)簽蛋白檢測(cè)抗體親水特性，F(xiàn)lag標(biāo)簽往往位于融合蛋白的表面上，因此比較容易被抗體接近并識(shí)別。不同的Flag標(biāo)簽抗體與Flag標(biāo)簽 有不同的識(shí)別和結(jié)合特性。

Fig. 1. Flag標(biāo)簽蛋白IP實(shí)驗(yàn)，IP (1:200) - WB (1:5,000)：未轉(zhuǎn)染的293細(xì)胞裂解液(lane A), 轉(zhuǎn)染了Flag標(biāo)簽蛋白的293細(xì)胞轉(zhuǎn)染裂解液 (lane B), 使用小鼠IgG作為陰性對(duì)照免疫沉淀293細(xì)胞裂解液(lane C),使用Flag單克隆抗體（1B10）IP轉(zhuǎn)染后的293細(xì)胞裂解液(lane D), 293細(xì)胞裂解液 中僅加入Protein G Beads (lane E).

Fig. 2. 使用Flag標(biāo)簽單克 隆抗體，通過(guò)免疫熒光實(shí)驗(yàn)（1:2000），分析轉(zhuǎn)染的Flag 重組蛋白在293細(xì)胞中的定 位，二抗為IFKine? Red 驢抗 小鼠，藍(lán)色為DAPI染色的細(xì) 胞核。