分享幾種微生物實(shí)驗中常用的稀釋劑

大多數(shù)細(xì)胞都適合在pH值7.2-7.4范圍內(nèi)生長,當(dāng)然不同種類細(xì)胞對pH值的要求也不盡一致,同一種細(xì)胞在不同生長時期的最適pH值也有所不同。原代培養(yǎng)細(xì)胞對pH值要求較嚴(yán),傳代培養(yǎng)細(xì)胞對pH值要求較寬。一般來講,細(xì)胞對偏酸環(huán)境的耐受性要強(qiáng)于偏堿環(huán)境。培養(yǎng)過程中，嚴(yán)格控制培養(yǎng)液的pH值,有利于細(xì)胞的生長。細(xì)胞生長越旺盛,代謝越活躍,pH值改變越迅速。代謝物的滯留使培養(yǎng)液變酸變黃,對細(xì)胞生長不利。因此，通常在培養(yǎng)液中均加入一定量的緩沖液,以保持pH值在一定范圍內(nèi)的相對穩(wěn)定。 平衡鹽溶液（Balanced Salt Solution，BSS）與細(xì)胞生長狀態(tài)下的pH值、滲透壓等環(huán)境狀態(tài)一致，具有維持滲透壓、控制酸堿平衡、供給細(xì)胞生存代謝所必需的能量和無機(jī)鹽成分等作用，可滿足體外實(shí)驗中，細(xì)胞生存并維持一定的代謝的基本需要。細(xì)胞在BSS中可生存幾個小時，且BSS配方簡單，成本低，因此成為配制各種組織細(xì)胞培養(yǎng)用液的基礎(chǔ)溶液，也是組織細(xì)胞體外短暫保存，分離、純化和洗滌等實(shí)驗操作的常用溶液。

磷酸鹽緩沖液(PBS) 是最常用的平衡鹽溶液(BSS)之一。由磷酸一氫鹽和磷酸二氫鹽的混合溶液組成,其中磷酸一氫鹽是呈堿性的,而磷酸二氫鹽是呈酸性的。當(dāng)微生物分泌酸性物質(zhì)時會與磷酸一氫鹽反應(yīng)生成磷酸二氫鹽；當(dāng)分泌堿性物質(zhì)時則與磷酸二氫鹽反應(yīng)生成磷酸一氫鹽。這樣就使整個體系維持在一個PH較穩(wěn)定的范圍。由于磷酸緩沖液近中性，恰在生理性pH范圍緩沖力最強(qiáng)，且成本相對較低，成為生命科學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用最廣、最普及的無機(jī)鹽緩沖液，也是免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗室必備的常用緩沖液之一。

0.85%生理鹽水 能保持細(xì)胞內(nèi)衛(wèi)的滲透壓一致，避免細(xì)菌的細(xì)胞壁被破壞而影響細(xì)菌的生長和繁殖。避免細(xì)胞破裂，它可以使細(xì)胞在一個液體環(huán)境中，維持正常生理學(xué)平衡。避免操作過程中微生物失水或吸水過多，導(dǎo)致死亡。菌落總數(shù)要求不太高，但是生理鹽水對于滲透壓的維持還是有一定作用的，特別是對于那些“半死半活”細(xì)菌的檢出很重要。但生理鹽水也不是在任何情況下都適用的，檢測鹽份較高的樣品時（如烤鰻、醬油等），不適合采用生理鹽水，這種情況下用蒸餾水更合適。磷酸鹽緩沖稀釋液是SN（出口食品行業(yè)檢驗標(biāo)準(zhǔn)）檢測菌落總數(shù)時推薦時，在GB中倒沒明確提出這個，而是一般性推薦生理鹽水。由于磷酸鹽緩沖稀釋液配制較為復(fù)雜，所以在正常情況下檢測一般樣品用生理鹽水，當(dāng)樣品鹽份較高時用蒸餾水。

無菌水通常是滅菌后的蒸餾水。做霉菌和酵母檢驗的稀釋液，用的就是蒸餾水。GB 4789.15-1994使用過高鹽查氏培養(yǎng)基，樣品稀釋再使用生理鹽水，容易搞亂鹽濃度。所以，標(biāo)準(zhǔn)制定者叫選擇了蒸餾水。實(shí)際上，蒸餾水無論對于單細(xì)胞的原核生物還是真核生物，都是有害的。從GB/T 4789.15-2003開始，刪除了這種培養(yǎng)基。但是沒有改變蒸餾水。在具體工作中，還是盡量不要使用蒸餾水來稀釋樣品為好。因為通常一份樣品常常需要同時檢驗細(xì)菌和真菌，不可能單獨(dú)稱量，之后分別稀釋的。

蛋白胨是動植物蛋白經(jīng)酶水解后的月示、胨、肽及氨基酸等復(fù)雜的混合物，吸濕性很強(qiáng)，易溶于水，系兩性電解質(zhì)，有一定緩沖作用。有學(xué)者自己做實(shí)驗時候用蛋白胨水代替磷酸鹽或者生理鹽水稀釋，目的是讓樣品中菌種在稀釋過程中保持活性，免于死亡，但是稀釋時間一定要控制在15分鐘之內(nèi)。