關(guān)于紅細(xì)胞裂解液的使用說明

紅細(xì)胞裂解液的作用原理
氯化銨是紅細(xì)胞裂解液的主要效應(yīng)物質(zhì)，氨根離子不能通過細(xì)胞膜，而其他離子可以通過，造成細(xì)胞內(nèi)外的離子濃度差異，形成了滲透壓差，外部的水分會(huì)擴(kuò)散至細(xì)胞內(nèi)，使紅細(xì)胞膨脹，達(dá)到裂解的效果。 一、組織細(xì)胞樣品：
1.新鮮組織經(jīng)胰酶或膠原酶等消化分散成單個(gè)細(xì)胞懸液，離心棄去上清液；
2.從4℃冰箱中取出ELS裂解液，按1:3-5的比例向細(xì)胞沉淀中加入ELS裂解液（1ml細(xì)胞壓積加入3-5ml裂解液），輕輕吹打混勻；
3.800-1000rpm離心5-8分鐘，離心棄去上層紅色清液；
4.收集沉淀部分，加入Hank’s液或無血清培養(yǎng)液離心洗2-3次；
5.如裂解不完全可重復(fù)步驟2和3；
6.重懸細(xì)胞，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；如提取RNA，最好是于步驟4開始使用DEPC水配制的溶液中進(jìn)行。

二、血細(xì)胞：
1.新鮮抗凝血，離心棄去上清液；
2.取出4℃冰箱預(yù)冷的ELS裂解液，按1:6-10的比例向細(xì)胞沉淀中加入ELS裂解液（1ml細(xì)胞壓積加入6-10ml裂解液），輕輕吹打混勻；
3.800-1000rpm離心5-8分鐘，離心棄去上層紅色清液；
4.收集沉淀部分，加入Hank’s液或無血清培養(yǎng)液離心洗2-3次；
5.如裂解不完全可重復(fù)步驟2和3；
6.重懸細(xì)胞，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；如提取RNA，最好是于步驟4開始使用DEPC水配制的溶液進(jìn)行。