分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用試劑配制

一. 常用貯液與溶液

1mol/L亞精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亞精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。

1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。

10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：將77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔徑的濾膜過濾除菌。

10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（組分V或分子生物學(xué)試劑級，無DNA酶）于9.5ml水中（為減少變性， 須將蛋白加入水中，而不是將水加入蛋白），蓋好蓋后，輕輕搖動，直至牛血清蛋白完全溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20℃。

1mol/L二硫蘇糖醇（DTT）：在二硫蘇糖醇5g的原裝瓶中加32.4ml水，分成小份貯存于-20℃。或轉(zhuǎn)移100mg的二硫蘇糖醇 至微量離心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫蘇糖醇溶液。

8mol/L乙酸鉀（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸鉀于足量的水中，加水定容到100ml。

1mol/L氯化鉀（KCl）：溶解7.46g氯化鉀于足量的水中，加水定容到100ml。

3mol/L乙酸鈉（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸鈉于約90ml水中，用冰乙酸調(diào)溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。

0.5mol/L EDTA:配制等摩爾的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三鈉鹽?；蚍Q取186.1g的Na2EDTA•2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。

1mol/L HEPES：將23.8gHEPES溶于約90ml的水中，用NaOH調(diào)pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。

1mol/L HCl：加8.6ml的濃鹽酸至91.4ml的水中。

25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT（異丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份貯存于-20℃。

1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2•6H2O于足量的水中，定容到100ml。

100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的異丙醇中，定容到10ml。分成小份并用鋁箔將裝液管包裹 或貯存于-20℃。

20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：將200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，輕輕搖動，直至蛋白酶K完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20℃。

10mg/mlRnase（無DNase）（DNase－free RNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸鈉水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris－HCl調(diào)pH至7.5，于-20℃貯存。（配制過程中要戴手套）

5mol/L氯化鈉（NaCl）：溶解29.2g氯化鈉于足量的水中，定容至100ml。

10N氫氧化鈉（NaOH）：溶解400g氫氧化鈉顆粒于約0.9L水的燒杯中（磁力攪拌器攪拌），氫氧化鈉完全溶解后用水定容至1L。

10％SDS（十二烷基硫酸鈉）：稱取100gSDS慢慢轉(zhuǎn)移到約含0.9L的水的燒杯中，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至1L。

2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使終體積為100ml。

100％三氯乙酸（TCA）:在裝有500gTCA的試劑瓶中加入100ml水，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。（稀釋液應(yīng)在臨用前配制）

2.5％ X－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）：溶解25mg的X－gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用鋁箔包裹裝液管，貯存于-20℃。

100×Denhardt試劑（Denhardt’s regent） 成分及終濃度 配制100ml溶液各成分的用量

2%聚蔗糖（Ficoll，400型） 2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40） 2%BSA（組分V）

水 2g 2g 2g

加水至總體積為100ml ,依照上表稱取各組分，溶于水中定容。過濾除菌及雜質(zhì)，分裝成小份于-20℃貯存。

10×標(biāo)準(zhǔn)DNA連接酶緩沖液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端連接） 成分及終濃度 配制10ml溶液各成分的用量 0.5mol/L Tris-HCl:5ml1mol/L 貯液 ,100mmol/L MgCl2:1ml 1mol/L 貯液,100mmol/L DTT:1ml 1mol/L 貯液,2mmol/L ATP: 200ul 100 mmol/L 貯液,5mmol/L 鹽酸亞精胺（可選）:50ul 1 mmol/L 貯液,0.5mg/ml BSA（組分V）（可選）:0.5ml 10 mg/mL 貯液 ,水: 2.25ml

將配制好的緩沖液分裝成小份，貯存于-20℃ 。

100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions） 可以購買到100mmol/L純dNTPs貯液，-80℃可貯存至少6個月。

10mmol/L dNTP混合液 成分及終濃度 配制20ul溶液各成分的用量

10mmol/L dATP

10mmol/L dCTP

10mmol/L dGTP

10mmol/L dTTP

水 2ul 100 mmol/L dATP 貯液

2ul 100 mmol/L dCTP 貯液

2ul 100 mmol/L dGTP 貯液

2ul 100 mmol/L dTTP 貯液

12ul

20％PEG 8000/2.5M NaCl

成分及終濃度 配制10ml溶液各成分的用量

質(zhì)量濃度為20％聚乙二醇

2.5mol/L 氯化鈉

水 20g

50ml 5 mol/L 氯化鈉 或 14.6g 固體氯化鈉

補(bǔ)足100ml

加聚乙二醇于含有氯化鈉的燒杯中，加水至終體積100ml，用磁力攪拌器攪拌溶解。

20×SSC

成分及終濃度 配制1L溶液各成分的用量

300mmol/L 檸檬酸三鈉（二水）

3mol/L 氯化鈉

水 88.2g

175.3g

補(bǔ)足1L

溶解檸檬酸三鈉（二水）和氯化鈉于約0.9L水中，加幾滴10N NaOH溶液調(diào)pH為7.0，用水補(bǔ)足體積至1L。

DEPC（焦碳酸二乙酯）處理水

加100ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC的體積分?jǐn)?shù)為0.1％。在37℃溫浴至少12h，然后在15 psi 條件下高壓滅菌20min，以使殘余的DEPC失活。DEPC會與胺起反應(yīng)，不可用DEPC處理Tris緩沖液。

甲酰胺（deionized formamide）

直接購買或加Dowex XG8 混合樹脂于裝有甲酰胺的玻璃燒杯中，用磁力攪拌器輕輕攪拌1h，可去除甲酰胺中的離子。經(jīng)Whatman 1號濾紙過濾除去樹脂后分成小份，充氮?dú)庥?80℃貯存（防止氧化）。

磷酸緩沖液（phosphate buffer）

按照下表所給定的體積，混合1 mol/L 的磷酸二氫鈉（單堿）和1mol/L 磷酸氫二鈉（雙堿）貯液，獲得所需pH的磷酸緩沖液。配制1 mol/L 的磷酸二氫鈉（NaH2PO4•H2O）貯液：溶解138g于足量水中，使終體積為1L;1mol/L 磷酸氫二鈉（Na2HPO4）貯液:溶解142g于足量水中使終體積為1L。

1mol/L 磷酸二氫鈉（ml） 1mol/L 磷酸氫二鈉（ml） 最終pH值

TE（用于懸浮和貯存DNA）

成分及終濃度 配制100ml溶液各成分的用量

10mmol/L Tris－HCl

1mmol/L EDTA

水 1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25℃）

200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）

98.8ml

Tris緩沖液（Tris-HCl buffer）

將121g的Tris堿溶解于約0.9L水中，再根據(jù)所要求的pH（25℃下）加一定量的濃鹽酸（11.6N），用水調(diào)整終體積至1L。

濃鹽酸的體積（ml） pH