影響考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白質(zhì)的因素

影響考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白質(zhì)的因素有哪些

1）靈敏度高,據(jù)估計(jì)比Lowry法約高四倍,其最低蛋白質(zhì)檢測(cè)量可達(dá)1mg.這是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)與染料結(jié)合后產(chǎn)生的顏色變化很大,蛋白質(zhì)－染料復(fù)合物有更高的消光系數(shù),因而光吸收值隨蛋白質(zhì)濃度的變化比Lowry法要大的多.

（2）測(cè)定快速、簡(jiǎn)便,只需加一種試劑.完成一個(gè)樣品的測(cè)定,只需要5分鐘左右.由于染料與蛋白質(zhì)結(jié)合的過(guò)程,大約只要2分鐘即可完成,其顏色可以在1小時(shí)內(nèi)保持穩(wěn)定,且在5分鐘至20分鐘之間,顏色的穩(wěn)定性最好.因而完全不用像Lowry法那樣費(fèi)時(shí)和嚴(yán)格地控制時(shí)間.

（3）干擾物質(zhì)少.如干擾Lowry法的K 、Na 、Mg2 離子、Tris緩沖液、糖和蔗糖、甘油、巰基乙醇、EDTA等均不干擾此測(cè)定法. 此法的缺點(diǎn)是：

（1）由于各種蛋白質(zhì)中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同,因此Bradford法用于不同蛋白質(zhì)測(cè)定時(shí)有較大的偏差,在制作 標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)通常選用 g—球蛋白為標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì),以減少這方面的偏差.

（2）仍有一些物質(zhì)干擾此法的測(cè)定,主要的干擾物質(zhì)有：去污劑、 Triton X-100、十二烷基硫酸鈉（SDS）和0.1N的NaOH.（如同0.1N的酸干擾Lowary法一樣）.

（3）標(biāo)準(zhǔn)曲線也有輕微的非線性,因而不能用Beer定律進(jìn)行計(jì)算,而只能用標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)測(cè)定未知蛋白質(zhì)的濃度.