實(shí)驗(yàn)中稀釋血清樣本的原因及方法

在ELISA實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，樣本稀釋是一個(gè)重要的步驟，為何樣本都需要稀釋呢？今天就先向大家著重介紹一下血清樣本稀釋的原因以及稀釋的方法。 一、稀釋血清的原因：

1、比賽按捺對(duì)比明顯，應(yīng)稀釋比賽物。

2、以下降非特異性反應(yīng)，使特異性的抗原抗體反應(yīng)充分體現(xiàn)出來(lái)。

血清稀釋用一般的PBS即可，可加1％的BSA，能有用下降ELISA本底，血清的稀釋倍數(shù)一定要事前確認(rèn)，但也不必一點(diǎn)點(diǎn)，做一個(gè)預(yù)實(shí)驗(yàn)即可，挑選OD在1.0左右的稀釋倍數(shù)，即ELISA中陰性孔OD在1.0，這么做出來(lái)的曲線對(duì)比會(huì)比較靈敏。

二、稀釋血清的方法：

1、先把蛋白稀釋一定的倍數(shù)，比如說(shuō)10倍、20倍稀釋?zhuān)ㄟ@樣可以大體確認(rèn)一個(gè)參數(shù)），將抗原進(jìn)行一系列稀釋包被反應(yīng)等等。

2、再用一定稀釋度的陽(yáng)性參閱血清和陰性參閱血清進(jìn)行孵育后洗刷，再加酶結(jié)合物進(jìn)行反應(yīng)，經(jīng)孵育洗刷后，加底物溶液顯色，停止反應(yīng)后分別測(cè)定O.D值，挑選O.D值≥1.0的那個(gè)抗原稀釋度為最適包被濃度。一般總是要挑選那個(gè)O.D值稍大于1.0，而不挑選小于1.0的抗原濃度。陰性參閱血清O.D值要求<0.1-0.2。就是要求陽(yáng)性參閱血清和陰性參閱血清的O.D值有明顯差別。

以上就是ELISA實(shí)驗(yàn)中稀釋血清樣本的原因及方法，大家在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中一定要多多注意，否則可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)的最終結(jié)果。