甘油冷凍保藏菌種的方法及注意事項

菌種保藏是將微生物菌種采用適宜的方法妥善保藏，避免其死亡、污染，并保持其原有性狀基本穩(wěn)定的一種實驗方法，也是微生物實驗室極為重要的一項基礎性工作。 甘油冷凍保藏菌種是目前實驗室應用最為廣泛的一種的菌種保藏方法，原理是以甘油為保護劑，低溫冷凍條件下，使微生物的新陳代謝趨于停止，從而達到長期有效的保藏。一般來說，保藏溫度越低，保藏效果越好。主要有以下注意事項：

1.選擇合適的培養(yǎng)基

勿使用選擇性培養(yǎng)基。一般使用非選擇性的增菌培養(yǎng)基，因為微生物在選擇性培養(yǎng)基中生長某些生物特性可能丟失，保藏的菌種的生物特性可能與標準菌株特性不同。

2.菌液的濃度

菌液的濃度一般越大，菌種保存時間越長。保藏時細菌常使用菌液，霉菌常用無菌水或生理鹽水制備成的孢子懸液。

3.甘油濃度

甘油終濃度一般為10%~20%。由于甘油原液太粘稠，需要配制合適的甘油-水溶液，將菌懸液與甘油以1:1的體積比充分混勻后，分裝至提前滅菌好的保藏管中，-20℃以下冰箱保存。

4.反復使用

對菌種進行保藏時注意“慢凍快化”，冷凍時降溫速率保持1℃/min,復蘇時用37℃水浴融化，能夠保證菌種最大的成活率。當冷凍菌種融化后，應避免再次冷凍，否則菌體的生存率會大幅度降低。

5.保存時間

該方法適合中長期菌種保藏，保藏時間一般為2-3年左右。