多肽常用的幾種水解方法

雖然多肽合成的氨基酸組成分析方法較多，且趨向更靈敏、更精確、更簡便、更快速，但還沒有一種方法可以單獨(dú)適用于所有氨基酸殘基的檢測，并且很多因素如溫度、時間、水解試劑、水解方法及多肽合成樣品中添加劑等對水解程度均有影響。常用的水解方法作簡要介紹如下: 1.酸性水解

酸性水解是應(yīng)用最為廣泛水解方法，可以使大多數(shù)氨基酸殘基完/全水解，最通用的水解劑是6 mol/L HCI。

條件:6 mol/L HCI、真空、110℃.水解時間為20-24h。即可用于液相水解模式也可用于氣相水解模式。但在該條件下，天冬酰胺和谷氨酰胺分別被完/全水解為天冬氨酸和谷氨酸，色氨酸則被完/全破壞，半胱氨酸先用二硫代二丙酸、4一乙烯呲啶或碘代乙酸保護(hù)后水解方可測定，酷氨酸部分被水解液所破壞，絲氨酸和蘇氨酸被部分水解。有些脂肪族氨基酸殘基間的肽鍵難于裂解，可以通過延長水解時間如水解92h甚至120h來解決。

2.堿性水解

堿性水解一般選用NaOH和KOH作為水解劑。該水解方法是HCI水解的互補(bǔ)法。因?yàn)閴A水解時，多數(shù)氨基酸遭到破壞或外消旋化，僅色氨酸是穩(wěn)定的。所以此法僅/限于測定色氨酸。

3.酶水解

用一組蛋白酶水解肽鏈，特別適用于對化學(xué)水解敏感的氨基酸如天冬酰胺和谷氨酰胺的測定。水解過程中氨基酸不發(fā)生消旋化，幾乎可以保持所有的組成氨基酸不被破壞。但是因?yàn)槊杆鈼l件溫和，對天冬酰胺、谷氨酰胺等皆無破壞作用，且反應(yīng)需要較長的時間，水解不完/全，酶本身也是蛋白質(zhì)，對樣品的測定結(jié)果可能會有干擾。

微波輻射能水解，一般情況下190℃微波水解15分鐘肽類即可完/全水解，導(dǎo)致完/全水解的時間大大縮短。在微波輔助酸水解和微波輔助酶水解中，水解時間可從過去的幾十小時縮短到幾十分鐘。

總之，多肽合成藥物水解方式應(yīng)根據(jù)其產(chǎn)品的性質(zhì)、研究目的、可獲得的樣品量及少實(shí)驗(yàn)室的具體條件采取適宜的水解方法。