平板計(jì)數(shù)瓊脂（PCA）使用方法

產(chǎn)品名稱：平板計(jì)數(shù)瓊脂(PCA)
英文名稱：Plate Count Agar
產(chǎn)品規(guī)格:250g
供應(yīng)商：上海遠(yuǎn)慕
產(chǎn)品用途：PCA培養(yǎng)基用于檢測食品、奶制品、飲用水、化妝品中微生物含量。既用于標(biāo)準(zhǔn)方法，也用于自動化螺旋板計(jì)數(shù)法。
儲存條件：4 ℃保存，3 年有效。

產(chǎn)品描述：
平板計(jì)數(shù)瓊脂（Plate Count Agar）簡稱PCA，是非選擇性固體培養(yǎng)基，用于食品、化妝品和飲 用水中微生物計(jì)數(shù)。
本培養(yǎng)基配方采用標(biāo)準(zhǔn)法配方。

平板計(jì)數(shù)瓊脂(PCA)原理：
胰蛋白胨提供有機(jī)氮源和游離氨基酸，酵母提取物提供生長因子，葡萄糖作為能量物質(zhì)。平板計(jì)數(shù)瓊脂培 養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分能夠支持牛奶及飲用水中絕大多數(shù)微生物的生長。

組成成分(g/L)：
胰蛋白胨     5.0
酵母提取物     2.5
葡萄糖     1.0
瓊脂     15.0
pH 7.0± 0.2     

配制方法：
1. 稱取以上組分，或者直接稱取本公司的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基23.5g 本品，用1000ml去離子水重懸，加熱攪拌使其全部溶解。
2. 平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基的滅菌溫度是：121°C高溫滅菌15min。
3. 待冷卻至55°C時(shí)倒20ml培養(yǎng)基到90mm無菌培養(yǎng)皿中。
4. 對于酵母和霉菌含量高的樣品，則用100mm培養(yǎng)皿，每個(gè)培養(yǎng)皿倒入20-25ml培養(yǎng)基。 待瓊脂表面干燥后使用。

本產(chǎn)品僅供科研使用，請勿用于醫(yī)藥，不能用于臨床治療診斷使用！

平板計(jì)數(shù)瓊脂使用方法（平板計(jì)數(shù)法、大腸菌群平板計(jì)數(shù)法、菌落總數(shù)平板計(jì)數(shù)法）

方法一  菌落計(jì)數(shù)總數(shù)之稀釋倒平板法
此方法是2010年版國家標(biāo)準(zhǔn) GB 4789.2-2010中的菌落總數(shù)計(jì)數(shù)方法。
1、稱取平板計(jì)數(shù)瓊脂23.5g，加入蒸餾水或去離子水1 L，攪拌加熱煮沸至完全溶解，分裝三角瓶，121℃高壓滅菌15min，滅菌完成后，將獲得的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基置于45度水浴中備用。
2、樣品的稀釋及處理。取樣品25g或者25ml，溶解于225ml無菌生理鹽水或者無菌磷酸鹽緩沖液中，然后使得樣品充分溶解和混勻。此時(shí)的樣品濃度是稀釋了原樣品10倍。   
3、10倍梯度稀釋樣品液。取樣品溶解液1 ml，加入9ml 無菌生理鹽水或者無菌磷酸鹽緩沖液中，吹打均勻，此時(shí)的溶液樣品濃度是原始樣品的0.01倍。每次吸取上一個(gè)樣品1 ml，加入到9ml無菌生理鹽水或者無菌磷酸鹽緩沖液中，根據(jù)這個(gè)方法繼續(xù)進(jìn)行樣品的連續(xù)梯度稀釋。
4、 選擇2-3個(gè)合適的稀釋度，吸取該稀釋度的1 ml稀釋液于無菌平皿中，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿。
5、稀釋液移入平皿后，及時(shí)將涼至45-50 ℃的瓊脂培養(yǎng)基(可放置于45℃水浴箱保溫) 注入平皿約15-25 mL，并轉(zhuǎn)動平皿使菌液稀釋液和瓊脂培養(yǎng)基混合均勻。同時(shí)將瓊脂
培養(yǎng)基傾入加有1 mL無菌生理鹽水或者磷酸鹽緩沖液的滅菌平皿內(nèi)作空白對照。  
6、待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置36±1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)48±2h。   
7、觀察結(jié)果并進(jìn)行計(jì)數(shù)。30-300個(gè)菌落為合適范圍，出具菌落總數(shù)計(jì)數(shù)報(bào)告。

方法二：菌落總數(shù)計(jì)數(shù)平板涂布法
1、稱取平板計(jì)數(shù)瓊脂23.5g，加入蒸餾水或去離子水1 L，攪拌加熱煮沸至完全溶解，分裝三角瓶，121℃高壓滅菌15min，備用。
2、待冷卻至55°C時(shí)倒20ml培養(yǎng)基到90mm無菌培養(yǎng)皿中，冷卻后成為可以使用的平板計(jì)數(shù)平板，待表面干燥后使用。對于酵母和霉菌含量高的樣品，則用100mm培養(yǎng)皿，每個(gè)培養(yǎng)皿倒入20-25ml培養(yǎng)基。 待瓊脂表面干燥后使用。
3、樣品的稀釋及處理。取樣品25g或者25ml，溶解于225ml無菌生理鹽水或者無菌磷酸鹽緩沖液中，然后使得樣品充分溶解和混勻。此時(shí)的樣品濃度是稀釋了原樣品10倍。   
4、10倍梯度稀釋樣品液。取樣品溶解液1 ml，加入9ml 無菌生理鹽水或者無菌磷酸鹽緩沖液中，吹打均勻，此時(shí)的溶液樣品濃度是原始樣品的0.01倍。每次吸取上一個(gè)樣品1 ml，加入到9ml無菌生理鹽水或者無菌磷酸鹽緩沖液中，根據(jù)這個(gè)方法繼續(xù)進(jìn)行樣品的連續(xù)梯度稀釋。
5、 選擇2-3個(gè)合適的稀釋度，吸取該稀釋度的0. 1 ml或者0.2 ml稀釋液于倒好的計(jì)數(shù)平板中，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)瓊脂平板。
6、使用無菌的玻棒或者其他無菌涂布物品，將稀釋液在平板上涂布均勻。   
7、將平板置于36±1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)48±2h。
8、觀察結(jié)果并進(jìn)行計(jì)數(shù)。30-300個(gè)菌落為合適范圍。出具菌落總數(shù)計(jì)數(shù)報(bào)告。