溶菌酶的溶菌作用機(jī)制

溶菌酶（lysozyme）又稱胞壁質(zhì)酶（muramidase）是一種能水解致病菌中黏多糖的堿性酶。主要通過破壞細(xì)胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之間的β-1,4糖苷鍵，使細(xì)胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，導(dǎo)致細(xì)胞壁破裂內(nèi)容物逸出而使細(xì)菌溶解。溶菌酶還可與帶負(fù)電荷的病毒蛋白直接結(jié)合，與DNA、RNA、脫輔基蛋白形成復(fù)鹽，使病毒失活。因此，該酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。 [基本原理]
溶菌酶的殺菌機(jī)理是其作用于細(xì)菌細(xì)胞壁的粘肽層，粘肽是細(xì)菌的細(xì)胞壁主要成分。溶菌酶能切斷粘肽結(jié)構(gòu)中的 N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰胞壁酸之間的β- 1,4糖苷鍵，破壞粘肽支架，使細(xì)胞壁破壞。由于細(xì)菌細(xì)胞壁的重要功能之一是保護(hù)細(xì)菌，即抗低滲，故細(xì)菌失去細(xì)胞壁的保護(hù)作用后，在低滲環(huán)境中可發(fā)生溶解。溶菌酶的主要作用對象是革蘭氏陽性菌。革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁粘肽層外還有脂多糖、外膜和脂蛋白結(jié)構(gòu)，故在一般情況下溶菌酶不易發(fā)揮直接做用。

[實驗材料]
溶壁微球菌（ M.Lysodeikticus）：本菌是由空氣中分離出的一種革蘭氏陽性菌，對人不致病，菌落黃色，普通瓊脂培養(yǎng)基生長良好，每月傳代一次或凍干保存，用于制備溶壁微球菌瓊脂平板。
標(biāo)準(zhǔn)溶菌酶：稱取溶菌酶標(biāo)準(zhǔn)純品，用 1/15mol.L -1 PBS配制為1000ug/ml原液，并稀釋為100、50、10 ug/ml標(biāo)準(zhǔn)液，用前保存在冰箱中；用于陽性對照及制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。
唾液：用無菌平皿收集唾液，可在同學(xué)間收集。
其它：無菌打孔器（孔徑 2mm），無菌毛細(xì)吸管、米尺等。

[實驗方法]
用無菌打孔器在溶壁微球菌瓊脂平板上打孔，用針頭挑出孔內(nèi)瓊脂，孔徑 2mm左右，孔距5-20mm。
用毛細(xì)吸管取新鮮收集的唾液加入瓊脂孔內(nèi)，每孔加一滴，每滴約有 0.025ml,同時加標(biāo)準(zhǔn)溶菌酶作陽性對照。
置 24-28 C°下12-18h觀察結(jié)果。

[實驗結(jié)果]
用小米尺或三角板量取小孔周圍溶菌環(huán)直徑，并作記錄，可與標(biāo)準(zhǔn)溶菌酶陽性對照作對比觀察。
如需定量測定檢品（唾液）中的溶菌酶含量，可將上述各種稀釋度的溶菌酶標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別加入小孔中，同法測定溶菌環(huán)直徑，用半對數(shù)紙制成標(biāo)準(zhǔn)曲線，檢品中的溶菌酶含量可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出。