微生物菌種復(fù)壯的意義和方法

對已衰退的菌種(群體)進(jìn)行純種分離和選擇性培養(yǎng)，使其中未衰退的個體獲得大量繁殖，重新成為純種群體的措施。狹義的復(fù)壯是一消極措施，一般指對已衰退的菌種進(jìn)行復(fù)壯；廣義的復(fù)壯是一積極的措施，即在菌種的生產(chǎn)性狀未衰退前就不斷進(jìn)行純種分離和生產(chǎn)性狀測定，以在群體中獲得生產(chǎn)性狀更好的自發(fā)突變株。

1、定義

 

菌種退化是指群體中退化細(xì)胞在數(shù)量上占一定比例后，所表現(xiàn)出群體性能變差的現(xiàn)象。因此，在已經(jīng)退化的群體中，仍然有一定數(shù)量尚未退化的個體。

 

2、復(fù)壯的方法

 

純種分離法

 

在衰退菌種的細(xì)胞群中，一般還存在著仍保持原有典型形狀的個體。通過純種分離法，設(shè)法把這種細(xì)胞挑選出來即可達(dá)到復(fù)壯的效果。純種分離方法極多，大體可分為兩類，一類較粗放，可達(dá)到“菌落純”水平（pure culture in colony level）；另一類較精細(xì)，可達(dá)到“菌株純”的水平（pure culture in strain level），現(xiàn)表解如下：

 

菌落純

平板表面涂布法

平板劃線分離法

瓊脂培養(yǎng)基澆注法

 

細(xì)胞純

用“分離小室”進(jìn)行單細(xì)胞分離

用顯微操縱器進(jìn)行單細(xì)胞分離

用菌絲尖端切割法進(jìn)行單細(xì)胞分離

用激光鑷子技術(shù)從毛細(xì)管中分離

 

通過宿主體內(nèi)復(fù)壯

 

對于因長期在人工培養(yǎng)基上移種傳代而衰退的病原菌，可接種到相應(yīng)的昆蟲或動、植物宿體中，通過這種特殊的“選擇性培養(yǎng)基”一至多次選擇，就可從典型的病灶部位分離到恢復(fù)原始毒力的復(fù)壯菌株。例如，經(jīng)長期人工培養(yǎng)的Bacillus thuringiensis會發(fā)生毒力減退和殺蟲效率降低等衰退現(xiàn)象。這時，就可將已衰退的菌株去感染菜青蟲的幼蟲，然后再從最早、最嚴(yán)重罹病的蟲體內(nèi)重新分離出產(chǎn)毒菌株。

 

淘汰已衰退的個體

 

有人發(fā)現(xiàn)，若對S. microflavus “5406”農(nóng)用抗生菌的分生孢子采用-10℃~-30℃的低溫處理5~7天，使其死亡率達(dá)到80%左右。結(jié)果會在抗低溫的存活個體中留下未退化的個體，從而達(dá)到了復(fù)壯的效果。

 

3、適用情況編輯一般情況下，對于生產(chǎn)企業(yè)，菌種管理都要求對菌種進(jìn)行定期的分離純化，也就是說分離篩選一般都是在退化之前就進(jìn)行的一中常規(guī)工作，是防止菌種退化或者生產(chǎn)育種而采取的一中積極措施。另外，在出現(xiàn)發(fā)酵水平較高和較低的情況下，也會進(jìn)行菌種的分離篩選。前者的目的是期望從發(fā)酵液中分離出高產(chǎn)菌株，而后者則是期望從可能已經(jīng)退化的種子中分離出尚未退化的菌株。