F10（Ham）液體培養(yǎng)基簡介說明

中文名稱:F10(Ham)液體培養(yǎng)基

供應商：遠慕生物

產(chǎn)品規(guī)格:500ml

產(chǎn)品成分:碳水、含氮、無機鹽、維生素、水(具體信息請來電詳詢)

簡介：F10（Ham）液體培養(yǎng)基又叫HAM’S/F?10培養(yǎng)基，含146mg/L L-谷氨酰胺，1100 mg/L D-葡萄糖，110mg/L丙酮酸鈉，1200mg/L碳酸氫鈉。pH值7.2-7.4，用于細胞培養(yǎng)。保存條件：2-8°C，一年有效。

應用：F10（Ham）液體培養(yǎng)基可用于制備一種新生豬胰島細胞培養(yǎng)基：

目前的豬胰島細胞培養(yǎng)體系就是從動物體中取出胰腺分離出胰島細胞，并將其培養(yǎng)于CMRL1066，RPMI等培養(yǎng)基內維持其生長或誘導其定向分化的過程，培養(yǎng)的胰島細胞一般用于移植手術治療糖尿病。

現(xiàn)今有多種新生豬胰島細胞培養(yǎng)方法，一般采用1?5天的新生豬，解剖取胰腺，破碎后用膠原酶消化成細胞團，置于細胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)3?5天，但純化獲得的有活性功能胰島細胞的量各不相同（2000IEQ/g?4000IEQ/g），培養(yǎng)胰島細胞的純度也各有差別（70?90%）。胰島細胞即使在低溫培養(yǎng)中也會因細胞凋亡而產(chǎn)生丟失，尤其是β細胞，并且培養(yǎng)過程長短難于選擇，培養(yǎng)時間短則β細胞不能發(fā)育成熟，培養(yǎng)時間過長則會有大量胰島細胞因凋亡產(chǎn)生丟失，一般回收率只有60%左右，且由于β細胞凋亡使得同等量胰島細胞胰島素分泌量減少（insulin/DNA值為49.00±1.95mIU/g）。培養(yǎng)過程難于清除污染，易于給后續(xù)的移植過程帶來炎癥反應?，F(xiàn)今沒有能大量提供高純度有活性并且穩(wěn)定產(chǎn)量的胰島細胞培養(yǎng)方法，所以如何通過建立優(yōu)化的培養(yǎng)基成分以及培養(yǎng)方式成為胰島細胞培養(yǎng)最迫切的問題。

CN201210330427.9建立一種改良的能大量提供有活性并且有穩(wěn)定產(chǎn)量的新生豬胰島細胞培養(yǎng)體系。本發(fā)明的新生豬胰島細胞培養(yǎng)基為，向HAM’S/F?10培養(yǎng)基中添加細胞凋亡抑制劑 Z?VAD?FMK 10微摩爾～50微摩爾，占培養(yǎng)基體積百分比15%～25%的人血白蛋白和占培養(yǎng)基體積百分比為5%～15%豬血清，以及每升培養(yǎng)基中加入6～10mmol的丙酮酸鈉。本發(fā)明使用過程是，室溫無菌條件下，將已分離純化的（5000～10000IEQ）豬胰島細胞懸液加入本發(fā)明所述的培養(yǎng)基中，在37℃、5%CO2、95%空氣培養(yǎng)箱內培養(yǎng)，制備的細胞在第一天更換培養(yǎng)皿及培養(yǎng)基，此后每隔一天更換一次。該優(yōu)化培養(yǎng)基降低了細胞凋亡率，增加了培養(yǎng)細胞回收率，延長了細胞培養(yǎng)時間，使得培養(yǎng)后胰島細胞較短時間培養(yǎng)的更為成熟，相同量胰島細胞的胰島素分泌量顯著提升，建立了穩(wěn)定高效，細胞獲得量大的長期胰島細胞長期培養(yǎng)體系。

與以往技術相比的有益效果：

1.細胞凋亡下降，回收率增加。

2.培養(yǎng)時間延長，培養(yǎng)細胞有敏感葡萄糖刺激應答，功能比一般培養(yǎng)的胰島細胞要成熟。

3.相同量的胰島細胞胰島素分泌量增加。4胰島β細胞活力增加。