四硫磺酸鹽煌綠增菌液基礎(chǔ)（TTB） 簡介說明

四硫磺酸鹽煌綠增菌液基礎(chǔ)(TTB)用于沙門氏菌選擇性增菌培養(yǎng)，需加入煌綠和碘液。

原理：蛋白胨和牛肉膏粉提供碳源、氮源和維生素滿足細(xì)菌生長的需求;氯化鈉可維持均衡的滲透壓;碳酸鈣能中和細(xì)菌產(chǎn)酸及吸收有毒的代謝產(chǎn)物;硫代硫酸鈉和四硫磺酸鈉結(jié)合可抑制腸道共生菌(四硫磺酸鈉是在培養(yǎng)基加入碘和碘化鉀時(shí)形成)，而具有四硫磺酸鈉還原酶的細(xì)菌能在此培養(yǎng)基中繁殖;膽鹽和煌綠可抑制大腸群菌和其它革蘭氏陽性細(xì)菌。

使用方法：

1、稱取本品93.6g，加入蒸餾水或去離子水1 L，攪拌加熱煮沸至完全溶解，分裝于三角瓶中，每瓶100mL。

2、將三角瓶放入滅菌鍋中，121℃高壓滅菌20min，冷至30℃，每100mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入四硫磺酸鈉煌綠增菌液配套試劑(SR0040)2支配成四硫磺酸鈉煌綠增菌液或再添加2支新生霉素(SR0030)配成MKTTn肉湯，混合均勻。

3、在無菌環(huán)境中，移取增菌液1mL轉(zhuǎn)種于10ml TTB/MKTTn中或移取前增菌液25ml轉(zhuǎn)種于225ml TTB中。

4、將已接種的試管放入恒溫培養(yǎng)箱中，42℃培養(yǎng)18—24h。

5、觀察結(jié)果。

應(yīng)用：用于牦牛沙門氏菌分離鑒定方法及流行病學(xué)研究

牦牛是青藏高原特有的物種，是當(dāng)?shù)啬撩裰匾纳a(chǎn)和生活資料。牦牛沙門氏菌病在牧區(qū)長期流行，引起牦牛嚴(yán)重的下痢和死亡。目前國內(nèi)外其他動物源沙門氏菌研究報(bào)道較多，但是對牦牛沙門氏菌報(bào)道較少。由于糞便是沙門氏菌主要來源，為了從源頭控制沙門氏菌的傳播，對體表健康牦牛糞便沙門氏菌監(jiān)測是具有重要公共衛(wèi)生學(xué)意義。

對體表健康牦牛糞便沙門氏菌的分離鑒定方法及牦牛源沙門氏菌的流行病學(xué)進(jìn)行了研究。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：根據(jù)ISO6579:2002(Annex D)標(biāo)準(zhǔn)、GB4789.42010標(biāo)準(zhǔn)、NMKL71標(biāo)準(zhǔn)和DIN EN12824:1998標(biāo)準(zhǔn)，在2010年采集26份牦牛糞便，選擇了三種選擇性增菌液TTB，SC，MSRV和三種選擇性培養(yǎng)基XLD，SS，CAS，比較了9種分離方法對牦牛糞便沙門氏菌分離的影響。

結(jié)果發(fā)現(xiàn)九種分離方法結(jié)果有差異，以TTB增菌液組合SS培養(yǎng)基分離率最高，為8/26。實(shí)驗(yàn)總共檢測到13頭牦牛攜帶沙門氏菌，通過比較發(fā)現(xiàn)TTB增菌液和MSRV增菌液組合CAS培養(yǎng)基和SS培養(yǎng)基，分離率最高為12/26。

根據(jù)國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道，比較了分別以invA、invE、stn、16S、bidui基因?yàn)闄z測靶點(diǎn)的5種PCR方法。48株牦牛沙門氏菌的鑒定情況，證明了這5種PCR方法檢出率均為100%，因此這5種方法可用于牦牛源沙門氏菌快速檢測。參照Liu B等人建立的沙門氏菌血清群PCR快速檢測方法，48株牦牛沙門氏菌中共鑒定出9株血清B群、1株C1群和37株D群，證明該方法適用于牦牛沙門氏菌血清群PCR快速檢測。