淺談血液樣本檢測微生物的取樣和保存

人體表面和體內(nèi)都生活著大量的微生物，包括真菌、細(xì)菌、古細(xì)菌和病毒，其總量甚至超過了人體自身細(xì)胞的數(shù)量。血液作為人體最為重要的一個組織，起到了輸送氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)、傳導(dǎo)熱量以及防止微生物感染的作用。人類的血液由54.3%的血漿、45%的紅細(xì)胞、0.7%的白細(xì)胞和數(shù)量不定的血小板組成。過去曾普遍認(rèn)為在健康人的血液中是不存在微生物的，只有在患有菌血癥等疾病的病人血液中才有可能檢測出微生物。但是近年來有越來越多的研究表明，在健康人的血液中也存在微生物，并且這些微生物與人體維持著微妙的共生關(guān)系。

隨著高通量測序技術(shù)逐漸成熟，對于人體微生物的了解也越發(fā)深入，且研究方向主要都集中在腸道微生物上，其次是口腔、眼睛、皮膚、肺、尿道等微生物分布較多的部位。血液作為一個曾一度被認(rèn)為是無菌的組織，相關(guān)的研究則要落后不少。

由于血液的組成成分比較復(fù)雜，因此在采樣過程中需要根據(jù)具體的實驗需求制定不同的取樣方法，比較常見的方法為取全血樣本進(jìn)行實驗，或是取血液中不同的組分進(jìn)行實驗。

一、全血取樣

若研究對象為全血中的微生物，且不需要考慮樣本中細(xì)胞的活性，可以直接將樣本放在-80℃冰箱中保存，如果沒有-80℃冰箱，可以短期凍存在-20℃冰箱，也可以在取樣后加入抗凝劑EDTA或肝素等，或是直接使用含有抗凝劑的血液采集管，將樣本與抗凝劑與充分混勻后放在冰箱中凍存?？鼓齽┛梢杂行У刈柚寡“寰奂?，防止發(fā)生凝血，保證細(xì)胞的形態(tài)在較長的一段時間內(nèi)不會發(fā)生變化。

若還需要考慮樣本中微生物的活性，或是要對微生物進(jìn)行培養(yǎng)的話，則必須使用抗凝劑防止樣本凝固，并將樣本存放在室溫或是4℃冰箱中。此類樣本存放的時間不宜過長，建議盡快進(jìn)行后續(xù)的實驗。

二、血液中不同組分的取樣

若研究對象為血液中的血漿、白細(xì)胞或紅細(xì)胞中的微生物，并且不考慮樣本中細(xì)胞的活性，則建議在取樣后盡快加入抗凝劑并將樣本離心，此時樣本會分為三層，如下圖1所示。 最上層的淡黃色透明液體為血漿，其中含有水、血漿球蛋白、血清蛋白、無機(jī)鹽等物質(zhì)。中間一層白色的薄層為白細(xì)胞和血小板，其中主要含有中性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞等白細(xì)胞以及血小板。最下層主要為紅細(xì)胞，整體呈暗紅色，且為不透明的固體狀。按照實驗需求取出不同的組分，并盡快將樣本凍存在-80℃冰箱中，如果沒有-80℃冰箱，可以短期凍存在-20℃冰箱，以便進(jìn)行后續(xù)的實驗操作。

若還需要考慮血液樣本中微生物的活性，或是要對微生物進(jìn)行培養(yǎng)，則建議在血液中加入抗凝劑后將樣本置于室溫或是4℃冰箱中，待需要進(jìn)行實驗的時候再離心并取出需要的組分。此類樣本的存放時間不宜過長，建議盡快進(jìn)行后續(xù)的實驗。