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細(xì)胞遷移和細(xì)胞侵襲檢測方案

2021-05-20 11:55 來源:上海遠(yuǎn)慕生物試劑
細(xì)胞遷移是正常細(xì)胞的基本功能之一,是機(jī)體正常生長發(fā)育的生理過程,也是活細(xì)胞普遍存在的一種運(yùn)動形式。胚胎發(fā)育、血管生成、傷口愈合、免疫反應(yīng)、炎癥反應(yīng)、動脈粥樣硬化、癌癥轉(zhuǎn)移等過程中都涉及細(xì)胞遷移。因此通過對細(xì)胞遷移(包括細(xì)胞侵襲)的研究,對阻止癌癥轉(zhuǎn)移、異體植皮等醫(yī)學(xué)應(yīng)用方面具有一定意義。

細(xì)胞遷移分析通常在細(xì)胞培養(yǎng)物中開展,目前流行的方法主要有:Boyden小室(跨膜法)、間隙封閉分析(gap-closure assay)等。

Boyden小室法:



Boyden小室由上、下兩室組成,中間以微孔濾膜隔開。將趨化劑加入下室中,形成梯度,而細(xì)胞接種在上室中。細(xì)胞放置在其中一個室內(nèi),或接種在膜的一面,將要研究的趨化試劑或抑制劑放置于另一室內(nèi)。受趨化劑影響,細(xì)胞會穿過膜上的微孔從上室移動到下室。之后,通過固定、染色和觀察,穿過膜的細(xì)胞數(shù)就可以在顯微鏡下進(jìn)行檢測。這種分析方法的優(yōu)點(diǎn)是可用于分析貼壁或不貼壁細(xì)胞,并可檢測趨化梯度下的遷移。缺點(diǎn)是趨化試劑的濃度梯度不可知且是變化的,所以這種分析傳統(tǒng)上大多只用于終點(diǎn)法,不適用于實(shí)時動態(tài)遷移。需要注意的是,我們必須選擇比細(xì)胞直徑略小的濾膜孔徑。如果細(xì)胞在梯度的刺激下,它們會拼命擠過去。一般來說,3um的孔徑適合白細(xì)胞或淋巴細(xì)胞遷移。5um的孔徑適合成纖維細(xì)胞或癌細(xì)胞,也適合單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。而8um的孔徑適合大多數(shù)細(xì)胞,這一孔徑支持大多數(shù)上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的蕞佳遷移,但不適合淋巴細(xì)胞。

細(xì)胞遷移類型分為三類:趨化性、趨觸性,以及細(xì)胞轉(zhuǎn)移。其特點(diǎn)分別如下:

1、趨化性:細(xì)胞向周圍環(huán)境中的趨化因子遷移

2、趨觸性:細(xì)胞沿細(xì)胞外基質(zhì)的梯度方向遷移

3、細(xì)胞轉(zhuǎn)移:細(xì)胞通過血管內(nèi)皮向趨化因子的遷移

在細(xì)胞侵襲中,細(xì)胞需要破壞或調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)。在Boyden分析中加入一層ECM蛋白,即可將細(xì)胞遷移分析轉(zhuǎn)換成侵襲分析,遠(yuǎn)慕可提供包被不同ECM單組分及全組分ECM的細(xì)胞侵襲檢測試劑盒。

間隙封閉分析:

讓細(xì)胞在孔的底部圍繞一個阻止細(xì)胞生長的區(qū)域(如在孔底部中央放置阻塞物)生長。試驗(yàn)在移除阻塞物后開始,可觀察單層細(xì)胞遷移到原先的空白區(qū)域中。優(yōu)點(diǎn)是可以對細(xì)胞遷移進(jìn)行實(shí)時監(jiān)測,避免與創(chuàng)傷相關(guān)的因子可能造成的復(fù)雜性。另外,可在細(xì)胞層上加一層基質(zhì),進(jìn)行3維細(xì)胞遷移的分析。這種方法操作簡單且重復(fù)性好,以簡單方便的形式精準(zhǔn)地監(jiān)則細(xì)胞遷移,既可用于終點(diǎn)法,也可用于實(shí)時動態(tài)遷移的分析。缺點(diǎn)是這種方法不能分析不貼壁細(xì)胞及趨化梯度下的細(xì)胞遷移。
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