DEAE-葡聚糖溶液(10mg/ml)說明書

【產(chǎn)品名稱】DEAE-葡聚糖溶液(10mg/ml)
【規(guī)格】10ml
【分類】細(xì)胞其他
【儲(chǔ)存條件】-20℃,6個(gè)月
【用途】轉(zhuǎn)染DNA到細(xì)胞中
【注意事項(xiàng)】主要由DEAE-葡聚糖、TBS組成。

簡介：將DNA導(dǎo)入細(xì)胞的方法很多，采用DEAE-葡聚糖轉(zhuǎn)染法主要優(yōu)點(diǎn)是相對簡單、快速、同次試驗(yàn)內(nèi)和不同次實(shí)驗(yàn)間的重復(fù)性較好，該法尤其適用于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染。DEAE-葡聚糖溶液(10mg/ml)采用特殊溶劑溶解，經(jīng)過濾除菌，臨用前37℃保溫并充分混勻。

操作步驟(僅供參考)：
1、取對數(shù)生長期的細(xì)胞，制備成細(xì)胞懸液。將細(xì)胞密度調(diào)整到5×105個(gè)/ml接種至6孔板，培養(yǎng)12～24h。
2、用蒸餾水或TE將質(zhì)粒DNA稀釋，將DNA溶液直接加到轉(zhuǎn)染培養(yǎng)液至其終濃度為1.0μg/ml。
3、將DEAE-葡聚糖溶液(10mg/ml)預(yù)熱并顛倒混勻，加到DNA/轉(zhuǎn)染培養(yǎng)液使DEAE-葡聚糖終濃度為100μg/ml，蕞適濃度需要自行摸索。
4、將50～70%匯片的細(xì)胞培養(yǎng)物中的培養(yǎng)液輕輕吸出，換上適合體積的補(bǔ)充有DEAE-葡聚糖/DNA/轉(zhuǎn)染培養(yǎng)液孵育。
5、倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)會(huì)出現(xiàn)顆粒，有的細(xì)胞核出現(xiàn)固縮，有的細(xì)胞邊緣出現(xiàn)部分破碎。有效的DEAE-葡聚糖轉(zhuǎn)染常伴有25～75%的細(xì)胞死亡。
6、換用100mmol/L氯喹培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)：
1、某些特點(diǎn)細(xì)胞需要較長的轉(zhuǎn)染時(shí)間，因?yàn)槁揉屑?xì)胞毒性，可在轉(zhuǎn)染的蕞后時(shí)期加入。
2、轉(zhuǎn)染時(shí)，搖動(dòng)細(xì)胞可保障轉(zhuǎn)染效率均一，蕞適轉(zhuǎn)染時(shí)間需通過實(shí)驗(yàn)確定。
3、為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。