羅丹明123溶液(0.5mg/ml)實(shí)驗(yàn)步驟

中文名稱：羅丹明123溶液(0.5mg/ml)
產(chǎn)品規(guī)格：100ul
用途：線粒體膜電位檢測
注意事項(xiàng)：主要由羅丹明123、PBS組成，采用FACS檢測，激發(fā)波長511nm，發(fā)射波長535nm。
儲存條件：4℃，避光，12個月

Rhodamine 123是一種可以通過細(xì)胞膜的選擇性染色活細(xì)胞線粒體的熒光染料，呈黃綠色熒光。廣泛用作檢測線粒體膜電位，也常用于細(xì)胞凋亡檢測。它可以快速通過細(xì)胞膜，僅需幾分鐘就可以被具有活性的線粒體所俘獲，并且對細(xì)胞沒有任何毒性。

Rh123用于對許多種細(xì)胞進(jìn)行染色，包括植物細(xì)胞和細(xì)菌。由于細(xì)胞內(nèi)ATP的量與Rh123的熒光強(qiáng)度之間有相關(guān)性，因此Rh123被應(yīng)用于檢測細(xì)胞內(nèi)的ATP。


染色程序：
（1） 將0.4mgRh123溶解到1mL DMSO中制備成1mMRh123-DMSO溶液。
（2） 用載玻片準(zhǔn)備細(xì)胞。細(xì)胞數(shù)目應(yīng)為5×104~5×105個/mL。
（3） 孵育該載玻片，用PBS或Hank's液洗滌細(xì)胞。
（4） 用培養(yǎng)基稀釋1mM Rh123溶液以制備1~20µM Rh123緩沖液。
（5） 將Rh123緩沖液加入載玻片并在37℃下孵育30分鐘至1小時。
（6） 去除Rh123緩沖液并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞（洗滌細(xì)胞后為了固定，加入10%福爾馬林緩沖液并孵育15~20分鐘，接著用PBS洗滌）。
（7） 用帶有熒光素濾光片的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。