細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)產(chǎn)生細(xì)菌污染怎么辦

細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)常會遇到諸如外源污染、真菌污染、支原體污染、操作不當(dāng)?shù)雀鞣N問題，為解救細(xì)胞，需要針對不同問題對癥下藥，那么，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)產(chǎn)生細(xì)菌污染該如何解決呢？

細(xì)菌是一種原核細(xì)胞微生物，其大小以微米(μm)計(jì)。常見的污染細(xì)菌有革蘭氏陰性菌和大腸桿菌、假單胞菌等，革蘭氏陰性菌中白色葡萄球菌等比較常見。

一旦發(fā)生細(xì)菌污染較易發(fā)現(xiàn)，多數(shù)情況下培養(yǎng)液短期內(nèi)顏色變黃，表明有大量酸性物質(zhì)產(chǎn)生，出現(xiàn)明顯混濁現(xiàn)象；有時(shí)靜置的培養(yǎng)液液體初看不混濁，但稍加振蕩，就有很多混濁物漂起。倒置顯微鏡下觀察，可見培養(yǎng)液中有大量圓球狀顆粒漂浮。必要時(shí)可取少量培養(yǎng)液涂片染色檢查以證實(shí)細(xì)菌種類；有的培養(yǎng)液改變不明顯而又疑有污染，可取出少量培養(yǎng)液用普通肉湯接種或用未加雙抗藥物的培養(yǎng)液接種，也可取10ml細(xì)胞懸液以100rpm離心5min，沉淀中加入無抗生素的培養(yǎng)液2ml，置于37℃培養(yǎng)，24h可得結(jié)果。
污染后細(xì)胞發(fā)生病理改變，胞內(nèi)顆粒增多、增粗，最后變圓脫落死亡，造成試驗(yàn)失敗和細(xì)胞株(系)丟失。一旦發(fā)現(xiàn)細(xì)胞被細(xì)菌污染，需要采取如下解決方案：

(1) 丟棄所有已經(jīng)污染的細(xì)胞和培養(yǎng)基；

(2) 培養(yǎng)環(huán)境用新潔爾滅擦拭且UV滅菌24小時(shí)；

(3) 培養(yǎng)試劑中加入P/S雙抗。

此外，在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)盡可能使用一次性耗材及成品培養(yǎng)基，以減少細(xì)菌污染的可能性。