困難樣本RNA提取的技能你get到了嗎？

DNA、RNA和蛋白質(zhì)是三種重要的生物大分子，是生命現(xiàn)象的分子基礎。DNA的遺傳信息決定生命的主要性狀，而mRNA在信息傳遞中起著重要的作用。其他兩大類RNA，即rRNA和tRNA同樣在蛋白質(zhì)的生物合成中發(fā)揮著不可替代的功能。因此RNA在DNA和蛋白質(zhì)中間起著中介的作用，其重要性不言而喻。

在研究RNA的分子實驗中，獲得高質(zhì)量的RNA至關重要，但是有些樣本因為細胞結(jié)構(gòu)特殊、代謝產(chǎn)物極其豐富、本身RNA豐度低等因素，影響到RNA提取質(zhì)量。另外，由于RNA酶的廣泛存在并難以消減的頑強特性，使得RNA的抽提純化更為困難。

那么今天我們針對RNA提取相關知識展開簡短的介紹~

一、 RNA提取原則

(1) 保證RNA分子的完整性

(2) 排除DNA分子的污染

(3) 排除有機溶劑、金屬離子、蛋白質(zhì)、多糖、多酚、脂類的污染

(4) 獲得足量的核酸

(5)方法操作簡便，穩(wěn)定性強



 不同組織中RNA豐度示意圖

二、 RNA種類

有mRNA、rRNA、tRNA、LncRNA、circRNA、miRNA、piRNA、siRNA等

三、 RNA提取注意事項

1、操作環(huán)境干凈無灰塵，嚴格戴好口罩、手套等。

2、實驗所涉及的離心管、槍頭、移液器、電泳槽、實驗臺面等要用RNase抑制劑徹底處理。

3、實驗所涉及的試劑、溶液，尤其是水必須確保RNase-Free。

4、選擇合適的勻漿方法。

5、選擇合適的裂解液。

6、控制好樣品的起始量。

7、控制好裂解液與樣品量的比例。

8、RNA抽提成功的唯一經(jīng)濟標準是后續(xù)實驗的一次成功，而不是得率。即綜合RNA的得率和純度。

四、 RNA提取原理及常用方法問題

1、 RNA提取原理

RNA提取步驟，大致可分為裂解和純化。首先對樣品裂解，采用機械力、化學試劑等方法將RNA釋放出來，隨后去除蛋白質(zhì)、糖、酚、金屬離子等雜質(zhì)，再用無水乙醇、異丙醇沉淀或載體吸附RNA，之后洗滌溶解即可得到核酸。

2、RNA提取常用方法

    異硫氰酸胍/苯酚法（如Trizol法）

    試劑盒過柱法

    磁珠法

    改良方法

3、RNA提取過程中常見問題