菌種代號的意義、菌種傳代與保存方法

菌種代號的意義

國內(nèi)常見微生物檢驗所用的菌種代號是CMCC（F）或 CMCC（B）

CMCC -- 中國醫(yī)學(xué)菌種保藏中心

B -- 代表細菌， F --代表真菌。

大腸桿菌[CMCC (B) 44102]；

乙型副傷寒沙門桿菌[CMCC (B) 50094]；

銅綠假單胞菌[CMCC (B)10104]；

金黃色葡萄球菌[CMCC (B)26003]；

生孢梭菌[CMCC(B)64941]；

白色念珠菌[CMCC(F)98001]。

常用菌種保藏方法

(一) 菌種保藏的原理

根據(jù)微生物的菌種生理、生化特性，在人工創(chuàng)造的條件下盡量降低微生物細胞的代謝強度，使細胞基本處于休眠狀態(tài)，生長繁殖受到抑制但又不至于死亡，以減低菌種的變異率。低溫、干燥、缺氧、缺乏營養(yǎng)等環(huán)境條件都有抑制微生物的代謝作用。

低溫、干燥、真空是用于菌種保藏的重要手段。

選擇保藏方法時，首先應(yīng)考慮方法能否長期地保持菌種原有的特性，同時也應(yīng)兼顧到方法的經(jīng)濟和簡便。在實際工作中，往往多種條件同時使用，以提高保藏效果。

（二）菌種保藏步驟

① 挑選特征典型的純菌菌落；

② 確定保藏的合適菌體形態(tài)；

③ 選擇最適宜的保藏方法；

④ 定期對保藏菌種進行檢查，觀察是否發(fā)生變化，若有變化，須改變保藏方法。保藏期滿應(yīng)及時進行移種。

1.瓊脂斜面低溫保存法

（1）方法：將經(jīng)常使用的菌種的典型菌落接種在斜面（某些特殊菌種可用液體培養(yǎng)基）上，按規(guī)定的溫度和時間培養(yǎng)，待充分生長后，把培養(yǎng)好的新鮮菌種用牛皮紙保好，為減緩培養(yǎng)基的水分蒸發(fā)，延長保藏時間，可將菌種保藏管的棉花塞換成橡膠塞。放在4℃左右的冰箱中保藏。每隔 2~3個月移種一次，繼續(xù)進行保藏。若用半固體高層培養(yǎng)基穿刺培養(yǎng)，一般可保藏半年 ~ 一年。有的甚至更長時間。

（2）適用范圍：細菌、酵母菌、霉菌保藏。

（3）特點：優(yōu)點是--簡便，易于推廣；一般不需要另選擇保藏用培養(yǎng)基；對大多數(shù)微生物都適用；缺點是--保藏期太短；傳代次數(shù)多，易發(fā)生變異及污染。

（4）注意事項：保藏的菌種應(yīng)是生命活力旺盛的新鮮培養(yǎng)物，至少應(yīng)是第三代的培養(yǎng)物。

保藏時，破傷風(fēng)桿菌可用庖肉培養(yǎng)基；生孢梭菌用流體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基。必須定期檢查保藏菌種冰箱的溫度、濕度以及菌種管的棉塞是否松動或生霉，如有異常應(yīng)及時處理。

每次移植后，應(yīng)與原菌種的編號、名稱逐一核對，確證培養(yǎng)基特征和純度無誤后再繼續(xù)保藏。

保藏菌種的培養(yǎng)基應(yīng)無糖，其他菌類含糖小于2%為宜，以免產(chǎn)酸過多，影響菌種存活。

銅綠假單胞菌在冰箱中易發(fā)生菌體自溶而死亡，不宜用本法保存。

2. 液體石蠟保存法

本法是用石蠟將培養(yǎng)物與空氣隔絕，以降低菌種的生理生化水平，并可防止水分蒸發(fā)，從而延長菌種的保藏期。

（1）方法：將菌種接種于斜面或穿刺于0.3~0.5 %瓊脂半固體高層培養(yǎng)基中，培養(yǎng)好備用。取化學(xué)純的液體石蠟裝在試管中，每管10~15mL，加棉塞，瓶口包上紙，121℃高壓滅菌30min，取出置37℃溫箱或110~170℃烤箱中1~2h或干燥器內(nèi)除去液體石蠟中的水分。

將上述液體石蠟加入培養(yǎng)好的菌種試管內(nèi)，液體石蠟液面以高出培養(yǎng)基最上端1㎝為宜，將試管直立，放入4℃冰箱中保藏。

（2）適用范圍：適用于保藏部分霉菌，酵母菌和放線菌，對細菌保藏效果較差。

（3）特點：本方法簡便易行，是實驗室常用的一種保藏方法，該法主要使菌種與空氣隔絕。

（4）注意事項：

① 保藏時，用新鮮培養(yǎng)物接種，應(yīng)檢查純度和特征后，方可進行保藏；

② 保藏過程中，需經(jīng)常觀察斜面是否干燥，如干燥， 需重新移種；

③ 使用菌種時，先將菌種管傾斜使液體石蠟流至一邊，再用接種針挑取培養(yǎng)物接種到新鮮斜面上培養(yǎng)，待長出新培養(yǎng)物后，再移種一次到新斜面上即可使用；

④ 將沾有少量液體石蠟的接種針浸于95%酒精中片刻，再燒灼滅菌，以免直接在酒精燈下燒灼時，液體石蠟四濺，引起污染；

⑤ 液體石蠟在菌種管中高出培養(yǎng)基的高度要嚴格控制，如太多，會影響菌種交換氣體，使保藏效果不好；如太少,斜面容易干燥，將縮短保藏期。一般以高出斜面1cm為宜；

⑥ 制備無菌液體石蠟時，每管裝量不能太多,否則分裝到菌種培養(yǎng)基中易造成污染。

菌種的復(fù)蘇與保存

菌種的復(fù)蘇與保存應(yīng)在專用超凈工作臺或生物安全柜內(nèi)進行。