細胞培養(yǎng)基礎——處理方法

一、 貼壁細胞

接收到細胞，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片， 顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。

用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的) 。

嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。

將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出(嚴禁直接傾倒)，放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。

用PBS 2-3mL輕輕洗細胞表面，洗1-2遍，吸走PBS，加入0.25%胰酶EDTA 1ml,37度培養(yǎng)箱消化，消化到顯微鏡下觀察細胞變圓但未完全脫落時，吸取正在消化的胰酶輕輕吹打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止消化，混勻細胞。

900rpm, 3min離心，加新的培養(yǎng)基重懸細胞。

傳代換新的細胞培養(yǎng)瓶，放置于37℃，5% CO?的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

二、 懸浮細胞

接收到細胞，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。

用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。

嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。

細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的細胞吹打均勻,用吸管將培養(yǎng)基完全吸出(嚴禁直接傾倒)。

900rpm, 3min離心，加新的培養(yǎng)基重懸細胞。

換新的細胞培養(yǎng)瓶和新鮮培養(yǎng)基，放置于37℃，5% CO?的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。