PCR方法操作中的注意事項(xiàng)

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction)，簡(jiǎn)稱PCR，是一種分子生物學(xué)技術(shù)，用于放大特定的DNA-片段。可看作生物體外的特殊DNA復(fù)制。

PCR是實(shí)驗(yàn)室常用的實(shí)驗(yàn)方法，那么在PCR方法操作中，需要注意哪些事項(xiàng)呢？今天小編帶您了解一下。

配 膠

1.電子稱的使用，要時(shí)刻注意保持電子稱的精確性，保持清潔，根據(jù)不同的濃度的膠稱瓊脂糖。

2.加 TAE（化學(xué)試劑）的量要適當(dāng)，以免配出來的膠太薄導(dǎo)致膠孔太淺或濃度太低。

3.倒膠前膠托一定要洗干凈，并擦干；倒膠時(shí)要待膠冷到一定溫度搖勻盡量不要產(chǎn)生氣泡。若膠液的溫度太高要頂在膠托防止膠托變形。

點(diǎn)樣電泳

1.loading要點(diǎn)均勻，控制在 1~2ul的量，并做好對(duì)應(yīng)標(biāo)記。

2.加樣時(shí)，槍頭要上緊，吸樣均一準(zhǔn)確，排液時(shí)吸頭不要有殘留。

3.點(diǎn)樣前最-好檢查待用膠是否合格；點(diǎn)樣時(shí)要對(duì)準(zhǔn)膠孔，盡量點(diǎn)完所有的樣。

4.點(diǎn)完樣勿忘點(diǎn) marker并擺正膠位，電泳儀正負(fù)極不要插反，電泳槽的蓋子要蓋緊。

染 色

1.碰到 EB（化學(xué)試劑）的手套要及時(shí)丟棄。

2.EB液要適時(shí)跟換，盤子要清洗。

3.抹布要嚴(yán)格區(qū)分，不可交叉使用

凝膠圖像分析儀的使用

1.使用前要注意清潔，以免影響膠圖的清晰度。

2.照膠時(shí)盡量減少開紫外燈的時(shí)間。

3.拍照時(shí)先關(guān)攝像頭再關(guān)紫外燈，不可顛倒，嚴(yán)格按照照膠的流程進(jìn)行。

4.照好的膠及時(shí)丟棄。