全血細(xì)胞培養(yǎng)染色體技術(shù)常用試劑配制

    一、國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用試劑配制

    （一）培養(yǎng)液

    （1）RPMI1640培養(yǎng)液：稱取RPMI培養(yǎng)基9.8g，碳酸氫鈉1.9g、青霉素100u/ml，加雙蒸水至1000ml，調(diào)節(jié) pH7.2～7.4無(wú)菌過(guò)濾凍存?zhèn)溆谩?br>
    （2）小牛血清商品

    （3）植物凝集素（PHA）

    （4）pH調(diào)整液：5% NaHCO3溶液高壓滅菌（8磅15min），0.1N稀鹽酸液100ml。

    （5）秋水仙素：10mg/ml無(wú)菌過(guò)濾高壓滅菌（8磅10min）。

    （6）磷酸緩沖液：pH7.4。

    磷酸氫二鈉28.8g(H2O)、磷酸二氫鉀2.67g(無(wú)水)，溶于1000ml雙蒸水中，加肝素，終濃度為100u/ml。

    （7）Giemsa染色液：

    Giemsa粉劑 1g

    甘油 66ml

    在研缽中，加入少量甘油油仔細(xì)研磨然后放甘油全部加磨，60℃溫箱中保溫2h，冷卻后加入甲醇66ml。裝入有色瓶中混合待用。染色時(shí)用pH7.4磷酸緩沖液稀釋10倍，隨配隨用。

    （二）固定液

    （1）甲酸：冰乙酸3：1混合即用。

    （2）PBS緩沖液配制：

    NaCl 16g Na2HPO4(12H2O) 5.65g

    KCl 0.4g KH2PO4 0.4g

    加雙蒸水至1000ml pH7.0。

    取5%胰酶（生理鹽水配制）1ml加入50ml PBS液中（最終濃度為0.025%），4℃冰箱待用。

    二、細(xì)胞培養(yǎng)（Bhatl B和McGee JOD,1990）

    1．完全培養(yǎng)基

    RPMI 76.0ml

    胎牛血清 20.0ml

    植物凝集素 2.0ml

    抗生素/抗菌素溶液（100