蛋白提取操作時應(yīng)注意的細(xì)節(jié)?。。?/h1>

2020-07-08 10:44 來源：上海遠(yuǎn)慕生物試劑

避免蛋白降解：

總體規(guī)則：蛋白酶普遍存在，在提取蛋白質(zhì)的步驟中，早些抑制，經(jīng)常抑制

分裝蛋白溶液，儲存于不同的溫度和不同的緩沖液中，測蛋白活性，找出最適儲存條件。

冷藏，并加入穩(wěn)定劑。這些穩(wěn)定劑一般都能充分保持蛋白的生物學(xué)活性。

將蛋白溶液儲于50%（V/V)的甘油或懸于硫酸銨（3.2M）中，避免凍存

冰結(jié)晶會造成物理剪切及蛋白變性。

避免酶的反復(fù)凍融，如果酶需要凍存，分裝成小管后凍存。

蛋白質(zhì)的儲存：

蛋白樣品在液氮中速凍，拿出后加入10-20%的甘油，長期儲存

整個實(shí)驗(yàn)過程中，都要將蛋白樣品置于冰上

從母管中吸取不同的蛋白時，都要用新鮮的槍頭

不要將未用的溶液倒回母管

戴手套操作，避免蛋白交叉污染，或是蛋白酶的污染

避免劇烈的震蕩，避免溶液中混入蛋白變性劑

實(shí)驗(yàn)的過程中應(yīng)避免灰塵進(jìn)入，灰塵包含60%的肌氨酸

操作過程中：

操作時總是小體積小量的操作，避免污染，并且動作要快

a：此類蛋白酶在活性中心包含絲氨酸和組氨酸。

b：此類蛋白酶在活性中心包含半胱氨酸（巰基，-SH-）。

c：此類蛋白酶在活性中心包含金屬離子（如：n2+，Ca2+，Mn2+）。

d：此類蛋白酶在活性中心包含天冬氨酸族。

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