遠慕實驗: 最亮的細胞轉(zhuǎn)染怎么做？

    做轉(zhuǎn)染實驗時小編就抱著一個信念，就是要給細胞點“顏色”看（熒光），但你知道嗎？就這個簡單的實驗過程，小小的細胞卻有著大大的能量，實驗過程中帶陽離子的脂質(zhì)體充當著“搬運工”的角色將質(zhì)粒從胞外“抓”到胞內(nèi)，而細胞為質(zhì)粒的復制、轉(zhuǎn)錄、翻譯提供“場所和原材料”，自己也跟著“增光填色”,但“上色”過程中會遇到一些問題，總結(jié)下來主要有以下二個方面：

    細胞狀態(tài)差

    轉(zhuǎn)染效率低

1. 

    Q1：轉(zhuǎn)染后細胞狀態(tài)較差

    A：分析：主要是鋪板和反應液配制的原因

     細胞狀態(tài)是整個實驗的關(guān)鍵，如果細胞狀態(tài)不好，則轉(zhuǎn)染后細胞狀態(tài)當然就好不了

     鋪板：過多或不均勻，細胞長的太滿就會狀態(tài)較差

     脂質(zhì)體本身有毒性，如果脂質(zhì)體加入量太多，會導致細胞狀態(tài)較差，或者細胞死亡，建議在做正式實驗前，先做一下預實驗，摸索一下質(zhì)粒和脂質(zhì)體的配比。

    Q2：轉(zhuǎn)染后熒光效率低

    A：分析：主要是細胞原因和“搬運”過程中的問題

     1、細胞狀態(tài)仍然是重中之重，如果有一段時間轉(zhuǎn)染效果很不理想，必須要換一批次細胞；

     2、加入目的質(zhì)粒后輕輕混勻，太用力會破壞混合液的結(jié)構(gòu)，

     3、質(zhì)粒與轉(zhuǎn)染試劑的比值： 過高一部分質(zhì)粒不能進入細胞，過低“搬運工”太多，有毒性且浪費；

     4、吸、打液體時注意槍頭內(nèi)液面高度，是否完全打出；

     5、反應液配好后等待20min，質(zhì)粒才會被完全包裹；

     6、反應液滴加加入細胞，使“脂質(zhì)體+質(zhì)粒”均勻分布；

     7、質(zhì)粒反復凍融影響濃度，盡量減少凍融次數(shù)；脂質(zhì)體 -20℃保存，用完應馬上放回；

     8、必要時需要檢測一下質(zhì)粒的濃度是否準確；