細(xì)胞培養(yǎng)室的那些事兒：消滅細(xì)胞污染

當(dāng)清晨的陽(yáng)光滿照大地時(shí)，在細(xì)胞培養(yǎng)室的角落，倒置顯微鏡旁，總會(huì)聚集著幾個(gè)孩紙，時(shí)不時(shí)的各種感慨。啊……細(xì)胞又長(zhǎng)滿了！咦……細(xì)胞咋飄了好多？唉……這個(gè)細(xì)胞狀態(tài)好差，能不能長(zhǎng)起來(lái)？完了完了，細(xì)胞污染了……

各種細(xì)胞，總會(huì)有各樣問(wèn)題讓人猝不及防。

雖說(shuō)細(xì)胞培養(yǎng)是基礎(chǔ)性的技術(shù)，但并不是每個(gè)人都能把每種細(xì)胞養(yǎng)的很好呢！

今天小編就來(lái)說(shuō)說(shuō)細(xì)胞培養(yǎng)室里細(xì)胞污染的事兒。

常見(jiàn)的細(xì)胞污染除了來(lái)自其它細(xì)胞系的交叉污染外，包括支原體、細(xì)菌、真菌污染。這些微生物污染對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生的影響很大呢！例如，它們會(huì)與宿主細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)；分泌酸性或堿性的副產(chǎn)物，使宿主細(xì)胞停止生長(zhǎng)；產(chǎn)生對(duì)細(xì)胞直接有毒的H2O2等等。

有同學(xué)說(shuō)，我使用了無(wú)菌的試劑和耗材，也遵循了無(wú)菌操作的要求，然而……還是莫名污染了。隔壁的同學(xué)還沒(méi)有我做的仔細(xì)呢！

那么，這種情形下，細(xì)胞到底為什么會(huì)污染呢?細(xì)胞污染要怎么辦呢？

小編覺(jué)得此同學(xué)和彼同學(xué)，最大的差異恐怕是操作環(huán)境了。給大家提個(gè)醒，細(xì)胞培養(yǎng)室的環(huán)境控制尤為重要啦。

有這樣一篇文獻(xiàn),作者對(duì)比了正常細(xì)胞培養(yǎng)室和污染培養(yǎng)室，在可能污染的位置放了血培養(yǎng)皿，根據(jù)微生物的生長(zhǎng)狀況，研究細(xì)胞污染的原因。以下是代表性的培養(yǎng)結(jié)果。

污染物是毋庸置疑的源頭，培養(yǎng)室的空氣、培養(yǎng)箱內(nèi)循環(huán)的空氣、培養(yǎng)箱的層架以及顯微鏡的載物臺(tái)和物鏡都可能是污染源。

其實(shí)，特別容易成為污染源的地方有這么幾個(gè)：

1）空調(diào)（估計(jì)是細(xì)胞培養(yǎng)室沒(méi)有做層流，也不經(jīng)常清洗）。

2）生物安全柜的空氣過(guò)濾系統(tǒng)。

3）生物安全柜的進(jìn)風(fēng)口（如下圖黃線圈出的位置，操作不慎的話，很容易把培養(yǎng)基或者血清之類的東西滴進(jìn)這個(gè)風(fēng)口，里面長(zhǎng)個(gè)霉什么的都是正常的，因?yàn)槟悴粫?huì)及時(shí)拆開(kāi)清理）。

4）顯微鏡（一般也不會(huì)有人用84擦顯微鏡吧）

5）培養(yǎng)箱的水盤(pán)和復(fù)蘇細(xì)胞用的水浴鍋（基本上是溫床，但是可以在里面加入硫酸銅，并且周期性更換來(lái)避免長(zhǎng)菌，但問(wèn)題是硫酸銅會(huì)損傷不銹鋼）。

6）離心機(jī)（也是重災(zāi)區(qū)）。

7）液氮罐（這個(gè)估計(jì)大家都不會(huì)注意的，但好在液氮罐污染可能性比較低）。

如果出現(xiàn)細(xì)胞污染的情況，勸你直接加入84，滅活以后丟棄。萬(wàn)一不幸，真菌肆虐，細(xì)胞培養(yǎng)室還要用甲醛熏蒸。

但是，你的細(xì)胞特別珍貴，污染了，怎么辦？那就要用抗生素了！

1）、最常用：青霉素、鏈霉素聯(lián)合抑制細(xì)菌，即所謂的“雙抗”，主要針對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌、陰性菌；對(duì)于細(xì)菌的感染也可用慶大或卡那霉素；

2）、如果真菌污染嚴(yán)重，可用兩性霉素／制霉菌素控制；

3）、若為支原體污染，可用慶大霉素／四環(huán)素／紅霉素；

注意，抑制真菌的抗生素，對(duì)細(xì)胞都有比較大的傷害。使用前，一般都建議先做預(yù)實(shí)驗(yàn)，估計(jì)對(duì)細(xì)胞本身的影響。

另外，有一種叫Primocin的抗生素，是專門(mén)設(shè)計(jì)用于保護(hù)原代細(xì)胞免受微生物污染的抗生素，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌、革蘭氏陰性菌、支原體和真菌均有殺傷作用。Primocin對(duì)原代細(xì)胞沒(méi)有毒性，因?yàn)槠渥饔玫陌袠?biāo)只存在于微生物上。其中細(xì)菌的靶標(biāo)為DNA解旋酶和原核細(xì)胞核糖體亞基30S和50S；真菌的靶標(biāo)為麥角固醇（一種只發(fā)現(xiàn)于真菌和酵母細(xì)胞膜的分子）。其推薦使用濃度為100mg/ml，無(wú)需添加青霉素/鏈霉素。
 

今天，你的細(xì)胞還好么？