您的細胞還好嗎？細胞活性檢測方法匯總

做細胞實驗的親們，經(jīng)常需要對細胞的活性進行驗證，如何知道自己研究的細胞是否還活著，活性怎么樣? PCR、抗體IHC染色等細胞分析方法進行活性檢測，由于只能反映某個時間點的細胞行為而具有局限性。當傳統(tǒng)細胞分析方法無法獲得預期結果時，使用實時細胞分析方法通常會得到很多新的生物學發(fā)現(xiàn)，因此活細胞分析技術在科研過程中發(fā)揮著越來越關鍵的作用。今天小編來為您介紹一下我們常用的分析細胞活性的方法。

實驗室細胞活性檢測的常用方法有（包括活性檢測和增殖檢測）：

化學發(fā)光法細胞活性檢測

熒光染料細胞活性檢測

細胞代謝檢測

細胞計數(shù)檢測（臺盼藍）

DNA合成增殖

化學發(fā)光法細胞活性檢：

腺苷三磷酸（ATP adenosine triphosphate）是由腺嘌呤、核糖和3個磷酸基團連接而成，水解時釋放出能量較多，是生物體內最直接的能量來源。ATP發(fā)光法，是通過檢測細胞內ATP含量來分析細胞活性及增殖的。常見的ATP發(fā)光法是利用外源螢火蟲熒光素/熒光素酶與細胞內的ATP發(fā)生氧化反應而產(chǎn)生光子，通過監(jiān)測光度來檢測ATP含量，從而分析細胞活性與增殖。

優(yōu)點：靈敏、快速、便捷、穩(wěn)定，同時可以把ATP數(shù)量化，用相對光強度（RLU）來進行定量。

熒光染料細胞活性檢測

在所有現(xiàn)有的熒光染料中，熒光素二乙酸酯（FDA）及其衍生物（如CFSE）是非熒光分子，其擴散到細胞中并被細胞內非特異性酯酶水解以產(chǎn)生熒光。熒光產(chǎn)物僅在具有完整細胞膜和活性酯酶活性的細胞中產(chǎn)生和積累,熒光產(chǎn)物會跟隨細胞分裂，被平均分配到子細胞中。進一步可用流式細胞儀分析細胞分裂增殖的情況，還可以通過細胞完整性對活死細胞分別進行標記。

優(yōu)點：活體標記、簡單、穩(wěn)定、熒光時間長

細胞代謝檢測

CCK-8檢測是一種基于 SST-8 的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測。其主要成分為水溶性四唑鹽 SST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)，SST-8 是一種類似于 MTT 的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成橙黃色的水溶性的甲臜。SST-8 被細胞內脫氫酶生物還原后生成的甲臜能夠直接溶解在培養(yǎng)基中。細胞增殖越多越快，則顏色越深；細胞毒性越大，則顏色越淺。對于同樣的細胞，顏色的深淺和細胞數(shù)目呈線性關系。

優(yōu)點：

1.CCK-8法產(chǎn)生的甲臜是水溶性的，不僅省去了溶解步驟，更因此而減少了該操作步驟帶來的誤差。.MTT實驗生成的甲臜不是水溶性的，需要使用 DMSO 等有機溶劑溶解。

2.線性范圍更寬，靈敏度更高。

3.對細胞無毒性，可以多次測定，選取最佳測定時間。

4.所用試劑在培養(yǎng)基中比 MTT 更加穩(wěn)定，實驗結果重復性好。

5.MTT 具有毒性，同時其生成的甲臜需要有機溶劑溶解，會對操作人員身體造成危害。

細胞計數(shù)檢測

臺盼藍染料是一種重要的染色劑，可以將死組織或死細胞染成藍色而具有完整細胞膜的活細胞或組織卻不著色。 由于細胞在通過膜的化合物中具有很高的選擇性，因此在活細胞中，臺盼藍不被吸收; 然而，它可以穿過死細胞中的膜。 因此，死細胞在顯微鏡下顯示為獨特的藍色。

優(yōu)點：用于辨別區(qū)分死細胞和活細胞，以及檢測細胞膜的完整性。

DNA合成增殖

BrdU是胸腺嘧啶的衍生物，常用于標記活細胞中新合成的DNA,可代替胸腺嘧啶選擇性整合到復制細胞中新合成的DNA中（細胞周期S期）這種摻入可以穩(wěn)定存在，隨著DNA復制進入子細胞中，BrdU的特異性抗原可以用于檢測BrdU的摻入，從而判斷細胞的增殖能力。