ACK紅細(xì)胞裂解液(ACK Lysis Buffer)說(shuō)明書(shū)

中文名稱: ACK紅細(xì)胞裂解液(ACK Lysis Buffer)
英文名稱:Diethyl 2,5-di(thiophen-2-yl)terephthalate
分子式:C20H18O4S2
分子量:386.48
保存：4℃,6個(gè)月
規(guī)格：100ml
用途：去除細(xì)胞懸液中的紅細(xì)胞,屬于溶解紅細(xì)胞方法的一種無(wú)菌溶液。
注意無(wú)菌操作,經(jīng)過(guò)濾除菌處理。
【操作步驟】
A、組織細(xì)胞樣本的常規(guī)操作
1、制備細(xì)胞懸液: 新鮮組織經(jīng)過(guò)胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，通過(guò)適當(dāng)方法制備成細(xì)胞懸液，離心棄上清。
2、裂解：加入3～5倍細(xì)胞沉淀體積的ACK Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解1～2min。本操作步驟在4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。
3、離心：4℃，400～500g離心5min，棄紅色上清。如無(wú)低溫離心機(jī)本步驟亦可在室溫下操作。
4、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3各一次。
5、洗滌：根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液，輕柔混勻重懸沉淀。4℃，400～500g離心2～3min，棄上清，離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液的量一般應(yīng)大于細(xì)胞沉淀體積的5倍以上。
6、如有必要，重復(fù)上述步驟5一次，共洗滌1～2次。
7、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。


B、組織細(xì)胞樣本的快速操作(無(wú)需洗滌)
1、制備細(xì)胞懸液：新鮮組織經(jīng)過(guò)胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，通過(guò)適當(dāng)方法制備成細(xì)胞懸液，離心棄上清。
2、裂解：加入細(xì)胞5倍細(xì)胞沉淀體積的ACK Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解1～2min。本操作步驟在4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。
3、加入15～20ml的 PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液，輕柔混勻。
4、離心：4℃，400～500g離心5min，棄紅色上清，本步驟亦可在室溫下操作。
5、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2～4各一次。
6、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。


C、血液樣本的常規(guī)操作
1、取新鮮抗凝血，400～500g離心5min，離心棄上清。
2、裂解: 加入6～10倍細(xì)胞沉淀體積的ACK Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解1～5min。本操作步驟在4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。(特別提醒：對(duì)于鼠的血液，裂解1～2min已經(jīng)足夠，對(duì)于人的外周血，宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間至4～5min，并且裂解過(guò)程中輕輕搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解)
3、離心：4℃，400～500g離心5min，棄紅色上清。如無(wú)低溫離心機(jī)本步驟亦可在室溫下操作。
4、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。
5、洗滌：根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液，輕柔混勻重懸沉淀。4℃，400～500g離心2～3min，棄上清，離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液的量一般應(yīng)大于細(xì)胞沉淀體積的5倍以上。
6、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
注意： 對(duì)于微量或少量的血液樣本，可以不用第1步操作，加入10倍血液體積的ACK Lysis Buffer進(jìn)行第2步操作，并在4℃或室溫裂解4～15min。對(duì)于鼠的血液，裂解4～5min已經(jīng)足夠;對(duì)于人的外周血，宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間至10min，但通常不宜超過(guò)15min，并且裂解過(guò)程中宜適當(dāng)搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。



D、血液樣本的快速操作(無(wú)需洗滌)
1、新鮮抗凝血中加入10倍體積的ACK Lysis Buffer，輕輕吹打混勻，裂解4～15min。本操作步驟在4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。(特別提醒：對(duì)于鼠的血液，裂解4～5min已經(jīng)足夠，對(duì)于人的外周血，宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間至10min，但通常不宜超過(guò)15min，并且裂解過(guò)程中宜適當(dāng)搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。
2、加入20～30ml PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液，輕柔混勻。
3、400～500g離心5min，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。
4、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。
5、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。