小伙伴們遇到過這種情況嗎?
當您的課題進行到白熱化程度時
卻發(fā)現(xiàn)細胞被污染了
此時大家的心情可謂五味雜陳
形容一下就是
問君能有幾多愁,眼淚恰似一江春水向東流
不過,別擔心
遠慕生物煉就火眼金睛
幫助大家識破各種污染,拯救您的細胞
我們先來看看污染的真面目,總結下來無非以下幾種類型:
我們一起來分析它們的特征:
1
真菌-深藏不露
真菌之所以深藏不露,是因為它們一般不會導致培養(yǎng)基變渾濁,所以在污染早期,很難發(fā)現(xiàn)它們的蹤跡。直到長到一定規(guī)模后在鏡下可觀察到分叉細絲狀的菌絲(有些呈管狀,樹枝狀,串珠狀的菌絲)(如圖1,圖2)。這類污染中,為首的污染代表是酵母菌:顯微鏡下常見成串的珠狀物,形態(tài)呈卵形,大約比細胞小5~10倍,當其進行出芽生殖時,會聚集成連體結構;爆發(fā)污染嚴重時,會造成培養(yǎng)基pH值改變,不易除去。
圖1. 真菌污染 圖2. 真菌污染
2
細菌-屢見不鮮
細菌種類繁多,分布廣泛,是最容易污染細胞的微生物。
圖3. 細菌污染
3
支原體-無孔不入
如下圖所示:
圖4. 支原體污染
4
黑膠蟲-神秘莫測
5
病毒-專一任性
圖5. 感染之前 圖6. 感染24小時后
6
細胞交叉污染-玉石難分
細胞交叉污染之所以“玉石難分”是因為其長相和實驗所養(yǎng)的目的細胞形態(tài)相似,難以分辨。對于細胞株的交叉污染,曾有文獻報道統(tǒng)計,目前使用的細胞株大約有15~20%不是科學家們所認為的細胞,而在生物醫(yī)藥領域中,細胞來源和細胞株身份鑒定檢測的觀念是普遍缺乏的。
細胞株的交叉污染,常因不經(jīng)意的實驗疏忽(不同細胞株分盤時,共享一瓶培養(yǎng)基;槍頭、移液管忘記更換,而造成不同細胞株之間的混合污染;實驗操作人員錄入錯誤細胞株名稱;傳代時的培養(yǎng)皿;冷凍細胞時的凍存管)而發(fā)生,繼而造成后續(xù)數(shù)據(jù)搜集錯誤。
目前大部分的科學期刊都已有“細胞相關實驗論文發(fā)表前,均需附上細胞鑒定報告”的規(guī)定(可查閱:文章發(fā)表前要求提供細胞鑒定的雜志),以此保證數(shù)據(jù)來源的正確性。
那么如何鑒別呢?細胞身份驗證方式:短串聯(lián)重復序列(STR)、同功酶分析、染色體組分型、擴增片段長度多態(tài)性(AFLP)的特征分析等方法。其中STR,是目前國際細胞庫(包括:ATCC、DSMZ或是JCRB)常用于細胞株身份鑒定方法。
☆ 溫馨提示,至少每半年一次進行細胞鑒定,理想情況每2-3個月鑒定一次,且課題開展前最好先確認使用的細胞身份。