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胎牛血清培養(yǎng)中怎么防止黑點(diǎn)生成

2019-12-02 11:55 來(lái)源:上海遠(yuǎn)慕生物試劑
   近期有客戶咨詢胎牛血清細(xì)胞培養(yǎng)中黑點(diǎn)如何防止生成?對(duì)此我司技術(shù)專員給出了詳細(xì)了解釋,為防止客戶由于操作方面而使黑點(diǎn)生成的辦法。因此定要做好以下幾點(diǎn)。方可使細(xì)胞培養(yǎng)順利。
    (1) 盡可能地減少血清凍融次數(shù)。
    (2) 培養(yǎng)基無(wú)需37℃水浴。
    (3) 培養(yǎng)基保持zuiPH 值7.0-7.2。
    (4) 嚴(yán)格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì),容器定期刷洗。
    (5) 掌握細(xì)胞傳代的zui時(shí)機(jī),細(xì)胞切勿生長(zhǎng)過(guò)老。
    一、化凍 
    將血清從-20 度冰箱中取出,室溫(或浸于自來(lái)水中)化凍(約需要30分鐘至2小時(shí),也可放于4度冰箱化凍過(guò)夜;化凍后若不馬上滅活,可以放入4度冰箱中暫時(shí)保存)
    二、滅活
    (1)放入室溫的水浴鍋內(nèi)開始加熱(同時(shí)放入一個(gè)空的血清瓶,內(nèi)裝100ml自來(lái)水,插入一根溫度計(jì),溫度監(jiān)控以此為準(zhǔn))
    (2)當(dāng)溫度計(jì)顯示56度時(shí),停止加熱,改為間斷加熱,維持56度(±0.5度)30分鐘(±3分鐘;若不小心使溫度上升超過(guò)56度,則:若仍未超過(guò)60度,且時(shí)間很短,比如不超過(guò)5分鐘,則仍可使用;若超過(guò)60度,或者時(shí)間較長(zhǎng),則棄去不用,或者嘗試用于一些普通細(xì)胞的培養(yǎng))
    (3)取出,自然冷卻至室溫(約需1-3小時(shí)),可分裝或-20度繼續(xù)凍存。

    三、分裝
    (1)轉(zhuǎn)入無(wú)菌間,在超凈臺(tái)內(nèi)將血清分裝入10ml離心管中(注意預(yù)先要將血清輕輕搖動(dòng)數(shù)周、混勻;用吸液管或吹大管吹出血清時(shí)要注意:不要吹出氣泡(血清很粘稠,很容易產(chǎn)生氣泡;如果產(chǎn)生氣泡, 則在酒精燈火焰上過(guò)一下)
    (2)放入-20 度冰箱凍存。
    (3)全部操作約需要4-6小時(shí)。

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