歡迎來到上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司官方網(wǎng)站！
13310162040

生化領(lǐng)域常用的幾種緩沖溶液及配制方法

2019-01-07 10:07 來源：上海遠(yuǎn)慕生物試劑
     緩沖溶液一般是由溶度較大的弱堿（或弱酸）及其共軛酸（或共軛堿）組成，可通過弱酸解離平衡的移動(dòng)達(dá)到消耗掉外來少量強(qiáng)酸、強(qiáng)堿，或?qū)股约酉♂尩淖饔?，使溶液pH值不發(fā)生明顯的變化，在科研工作、工業(yè)生產(chǎn)以及一切生命過程中，都是非常重要的。本文將對(duì)生化實(shí)驗(yàn)中常用的緩沖溶液及配制方法進(jìn)行簡(jiǎn)單的介紹。
 
PB和PBS緩沖溶液
        PB和PBS是生化實(shí)驗(yàn)中最為常用的緩沖液，0.1mol/L的磷酸鹽緩沖液（PB）常用于配制固定液、蔗糖等；0.01mol/L的磷酸鹽緩沖生理鹽水（PBS）主要用于漂洗組織標(biāo)本、稀釋血清等，其pH應(yīng)在7.25～7.35之間。
1．磷酸鹽緩沖液（Phosphate Buffer, PB）
        配制時(shí)，常先配制0.2mol/L的 NaH2PO4和0.2mol/L的Na2HPO4，兩者按一定比例混合即成0.2mol/L的磷酸鹽緩沖液（PB），根據(jù)需要可配制不同濃度的PB（見表1）。
2．磷酸鹽緩沖生理鹽水（Phosphate Buffered Saline, PBS）
        稱取NaCl 8.5～9g及0.2mol/L的PB 50mL，加入1000mL的容量瓶中，最后加重蒸水至1000mL，充分搖勻即可得到0.01mol/L的PBS。一般情況下，0.2mol/L PB的pH值稍高些，稀釋成0.01mol/L的PBS時(shí)，?？蛇_(dá)到要求的pH值，如果需要調(diào)整，通常通過調(diào)整PB的pH來實(shí)現(xiàn)。
表1. 0.2mol/L磷酸鹽緩沖液（pH5.7～8.0）
pH
0.2mol/L NaH2PO4(mL)
0.2mol/L Na2HPO4(mL)
5.7
93.5
6.5
5.8
92.0
8.0
5.9
90.0
10.0
6.0
87.7
12.3
6.1
85.0
15.0
6.2
81.5
18.5
6.3
77.5
22.5
6.4
73.5
26.5
6.5
68.5
31.5
6.6
62.5
37.5
6.7
56.5
43.5
6.8
51.0
49.0
6.9
45.0
55.0
7.0
39.0
61.0
7.1
33.0
67.0
7.2
28.0
72.0
7.3
23.0
77.0
7.4
19.0
 81.0
7.5
16.0
 84.0
7.6
13.0
 87.0
7.7
10.5
 89.5
7.8
8.5
 91.5
7.9
7.0
 93.0
8.0
5.3
 94.7
 
Tris緩沖溶液
        Tris緩沖液除被廣泛用作核酸和蛋白質(zhì)的溶劑外，還被用于不同pH條件下的蛋白質(zhì)晶體生長(zhǎng)和線蟲核纖層蛋白中間纖維的形成，同時(shí)也是蛋白質(zhì)電泳緩沖液的主要成分之一。
1. Tris-HCl緩沖液
        生化實(shí)驗(yàn)中常用的Tris-HCl緩沖液濃度為0.05mol/L，pH=7.6，主要用于配制Tris緩沖生理鹽水（TBS）、DAB顯色液。配制時(shí)，先以少量重蒸水（300～500mL）溶解60.57g Tris，加入HCl后，用1N的HCl或1N的NaOH將pH調(diào)至7.6，最后加重蒸水至1000mL，得儲(chǔ)備液，于4℃冰箱中保存。用時(shí)取儲(chǔ)備液稀釋10倍即可（見表2）。
表2. 0.05mol/L Tris-HCl緩沖液（pH7.19～9.10）
pH
0.2mol/L Tris(mL)
0.2mol/L HCl(mL)
H2O
7.19
10.0
18.0
12.0
7.36
10.0
17.0
13.0
7.54
10.0
16.0
 14.0
7.66
10.0
15.0
 15.0
7.77
10.0
14.0
 16.0
7.87
10.0
13.0
 17.0
7.96
10.0
 12.0 18.0
8.05
10.0
 11.0 19.0
8.14
10.0
 10.0 20.0
8.23
10.0
 9.0 21.0
8.32
10.0
 8.0 22.0
8.41
10.0
 7.0 23.0
8.51
10.0
 6.0 24.0
8.62
10.0
 5.0 25.0
8.74
10.0
 4.0 26.0
8.92
10.0
 3.0 27.0
9.10
10.0
 2.0 28.0
 
2. Tris緩沖生理鹽水（Tris Buffered Saline，TBS）
        TBS主要用于漂洗標(biāo)本，常用于免疫酶技術(shù)中。先以重蒸水少許溶解3.5～9g NaCl，再加0.5mol/L Tris-HCl緩沖液 100mL，最后加重蒸水至1000mL，充分搖勻使Tris終濃度為0.05mol/L。
3. Tris-TBS (PBS)
       常用濃度為1%和0.3%，1%Tris-TBS主要用于漂洗標(biāo)本，3%Tris-TBS主要用于稀釋血清。先以重蒸水少許溶解8.5～9g NaCl后，加入10mL (1%)或3mL (0.3%) Triton X-100及0.5mol/L Tris緩沖液1000mL(50mL)或（0.2mol/L的PB），最后加重蒸水至1000mL，充分搖勻。
二甲胂酸緩沖液
        先稱取二甲胂酸鈉（MW：214）42.8g，加蒸餾水至1000mL，獲得0.2mol/L的二甲胂酸鈉溶液；再取HCl 1.7mL加蒸餾水至1000mL ,配成0.1N，最后取0.2mol/L二甲胂酸鈉溶液500mL及0.1N HCl 28mL混合，加蒸餾水至1000mL，即為0.1mol/L的二甲胂酸鈉緩沖液。不同pH值的配制方法見表3。
表3. 0.1mol/L二甲胂酸鈉緩沖液（pH5.0～7.4）
pH
0.2mol/L二甲胂酸鈉（mL）
0.2N HCl(mL)
蒸餾水
5.0
25
23.5
51.5
5.2
25
22.5
52.5
5.4
25
21.5
53.5
5.6
25
19.6
55.5
5.8
25
17.4
57.5
6.0
25
14.8
60.3
6.2
25
11.9
63.1
6.4
25
9.2
65.8
6.6
25
6.7
68.3
6.8
25
4.7
70.3
7.0
25
3.2
71.8
7.2
25
2.1
72.9
7.4
25
1.4
72.9
HEPES緩沖溶液
        HEPES是一種非離子兩性緩沖液，其在pH 7.2~7.4 范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力，常用在生化診斷試劑盒、DNA/RNA提取試劑盒及PCR診斷試劑盒里，其最大優(yōu)點(diǎn)是在開放式培養(yǎng)或細(xì)胞觀察時(shí)能維持較恒定的PH值，并對(duì)細(xì)胞無毒性作用。使用終濃度為10~50mmol/L。關(guān)于HEPES 緩沖溶液的配制，根據(jù)用途，有以下幾種方法：
（1）119.15 g HEPES 溶解在400mL蒸餾水中，加0.5~1M 的NaOH水溶液調(diào)節(jié)至少所需pH，然后用蒸餾水定容至500mL，得1 M HEPES, pH = 7.0，于4°C保存；
（2） HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4·7H2O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液調(diào)節(jié)pH值，最后定容；
（3）將1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2HPO4·2H2O、0.2g葡聚糖和1g HEPES溶解在90mL的蒸餾水，用0.5M NaOH調(diào)節(jié)至所需pH值，再用蒸餾水定容至100mL即可。
MOPS
        MOPS Buffer，即3-嗎啉丙磺酸緩沖液，屬于生物緩沖劑，可作為二維凝膠電泳中等電聚焦電泳（IEF）的電解質(zhì)系統(tǒng)成分；還可應(yīng)用于Northern雜交，作為RNA的分離和轉(zhuǎn)膜時(shí)的緩沖液。常用的10×MOPS Buffer配制方法如下：
（1）稱量41.8 g MOPS，溶解于約700mL DEPC處理水中；
（2）使用2 N NaOH 調(diào)節(jié)pH值至7.0；
（3）向溶液中加入DEPC處理的1M NaOAC 20mL、0.5M EDTA(pH8.0) 20mL；
（4）定容至1 L，用0.45 μm 濾膜過濾除去雜質(zhì)，室溫避光保存。
        緩沖溶液在科研、醫(yī)學(xué)、工農(nóng)業(yè)中都有及其廣泛的應(yīng)用，研究工作的溶液體系pH值的變化往往會(huì)直接影響到研究工作的成效。在選擇和配制緩沖溶液時(shí)，要(1)選擇合適的緩沖系，確定pH位于緩沖范圍內(nèi)，并且不干擾主反應(yīng)；(2)有較好的緩沖能力，使緩沖體系有較大的緩沖容量；(3)濃度合適：總濃度過低，緩沖容量過小，總濃度過高，滲透壓過大。配制出合適的緩沖溶液，才能夠達(dá)到預(yù)期的實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/span>
收縮
QQ咨詢
  • 標(biāo)準(zhǔn)品
電話咨詢
  • 客服一  13310162040
  • 客服二  18001933641
郵箱咨詢
  • shyuanmusw@163.com