使用二抗的直接法與間接法的優(yōu)缺點(diǎn)!!!

表 1. 直接法與間接法的比較 直接檢測(cè)法中，標(biāo)記物通過(guò)共價(jià)鍵直接連接到一抗上。而對(duì)于間接檢測(cè)法，標(biāo)記物則是共價(jià)連接到與一抗特異性結(jié)合的二抗上。間接法檢測(cè)包括兩步：第一步，用未標(biāo)記的一抗進(jìn)行孵育，抗體與抗原結(jié)合（若存在抗原），洗去未結(jié)合的抗體（一般 3～5 次），第二步則是加入標(biāo)記二抗孵育（通常 1 小時(shí)），洗滌去掉未結(jié)合的二抗，然后量化結(jié)合在一抗上的標(biāo)記物。在直接法中，標(biāo)記物直接與一抗共價(jià)結(jié)合，因此僅需與含有抗原的樣本孵育這一步驟，而且只需一次洗滌，而間接法則需要兩輪孵育與洗滌步驟。直接法簡(jiǎn)化了試驗(yàn)的流程，降低了試驗(yàn)的變異性，增加了數(shù)據(jù)的可靠性。然而一抗的共價(jià)修飾可以導(dǎo)致抗體親和力的改變，這種情況的出現(xiàn)與標(biāo)記二抗帶來(lái)的非特異性結(jié)合的問(wèn)題相比而言，顯得無(wú)關(guān)緊要。下表列舉出了直接法與間接法的主要優(yōu)缺點(diǎn)比較。