如何選擇緩沖液 HEPES緩沖液的配制方法

如何選擇緩沖液 HEPES緩沖液的配制方法

如何選擇緩沖液， 緩沖液有什么優(yōu)點(diǎn)及缺點(diǎn)

一般來說，在選擇緩沖液時(shí)，我們需要遵循以下幾個(gè)要求，特別是需要確定該緩沖液所需的PH值，具體如何選擇請(qǐng)參考下面說明：

選擇緩沖體系，其解離常數(shù)pKa值應(yīng)該在設(shè)定的pH上下一個(gè)pH值單位內(nèi)，因?yàn)榫彌_液的pKa變化超過一個(gè)pH單位時(shí)，其緩沖能力就會(huì)明顯下降；

緩沖體系不應(yīng)影響蛋白質(zhì)的活性或者DNA的穩(wěn)定性，并避免其他離子的干擾；

最后，還要考慮溫度的影響：溫度不僅對(duì)緩沖液有影響，對(duì)細(xì)胞也有影響，大多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞在37℃的生理狀況下pH為7.0~7.5，而在溫度下降到0℃時(shí)可達(dá)到8.0。

那么緩沖液有什么優(yōu)點(diǎn)及缺點(diǎn)有哪些呢?由于緩沖液的品種特別多，所以我們拿出幾個(gè)系列的產(chǎn)品作詳細(xì)講述！
 

磷酸鹽緩沖液的優(yōu)點(diǎn)及缺點(diǎn)：

磷酸鹽緩沖液是使用最為廣泛的一種緩沖劑，由于它有二級(jí)解離，所以緩沖的pH值范圍很廣，可配置各種pH值的酸性、堿性和中性緩沖液。

A、優(yōu)點(diǎn)

易配成各種濃度

適用pH范圍寬

pH受溫度影響小

稀釋后pH變化小

B、缺點(diǎn)

易與常見的鈣離子、鎂離子及重金屬離子締合成沉淀

Tris緩沖液的優(yōu)點(diǎn)及缺點(diǎn)

Tris緩沖液是在生物化學(xué)研究中使用較廣泛的一種緩沖劑，其本身為弱堿，常用有效pH在“中性”范圍。

A、優(yōu)點(diǎn)

堿性較強(qiáng)，可以只用這一種緩沖液配置由酸到堿的但范圍pH緩沖液;

對(duì)生物化學(xué)過程干擾很小，不與鈣、鎂離子及重金屬離子發(fā)生沉淀。

B、缺點(diǎn)

pH受濃度影響較大，稀釋10倍，pH變化大于0.1

溫度效應(yīng)大，如4℃時(shí)pH=8.4，37℃時(shí)pH=7.4

易吸收空氣中的二氧化碳

HEPES緩沖液的優(yōu)點(diǎn)及缺點(diǎn)

HEPES是一種非離子兩性緩沖液，其在pH7.2~7.4范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力，常用在生化診斷試劑盒、DNA/RNA提取試劑盒及PCR診斷試劑盒里。

A、優(yōu)點(diǎn)

在開放式培養(yǎng)或細(xì)胞觀察時(shí)能維持較恒定的pH值，并對(duì)細(xì)胞無毒性作用。

B、缺點(diǎn)

在高濃度時(shí)對(duì)一些細(xì)胞可能有毒，與其他緩沖劑相比價(jià)格略貴。

更多緩沖液的優(yōu)點(diǎn)及缺點(diǎn)詳情請(qǐng)來電聯(lián)系上海遠(yuǎn)慕生化試劑廠家，本司所供應(yīng)的緩沖液產(chǎn)品滿足于用戶需求，下面我們一起來了解下HEPES緩沖液的配制方法。

HEPES緩沖液的配制方法詳細(xì)說明

HEPES緩沖液的配制方法

一、500ml 1 MHEPES, pH = 7.0 Stock solution的配制

119.15 g HEPES 溶解在400ml蒸餾水中，加0.5~1M 的NaOH水溶液調(diào)節(jié)至少所需pH(HEPES的有效pH 范圍是6.8~8.2)，然后用蒸餾水定容至500ml，于4攝氏度保存。

二、加少量鹽的HEPESBuffer配方(500ml)

HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液調(diào)節(jié)pH值，最后定容。

三、2×HEPES緩沖鹽溶液的配制

將1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucan or dextran)和1g HEPES溶解在90ml的蒸餾水，用0.5M NaOH調(diào)節(jié)至所需pH值，再用蒸餾水定容至100ml即可。

HEPES使用方法有兩種：

A、HEPES可按所需的濃度直接加入到配制的培養(yǎng)液中，再過濾除菌。每1000ml培養(yǎng)液中加入2.38克HEPES，待溶后用lNNaOH 調(diào)pH至7.2，濾過除菌后使用。此時(shí)HEPES的使用濃度為10 mmol/L。

B、亦可配成 100 x 貯存液(l mol/L)，使用前取 99ml培養(yǎng)液加入 lml貯存液，最終應(yīng)用濃度仍為10mmol/L。l mol/L(100 x)HEPES貯存液配制方法：取23.8g HEPES溶于90ml雙蒸水中，用lN NaOH調(diào)pH至7.5一8.0，然后用水定容至100ml，過濾除菌，分裝小瓶(2ml/瓶)，4℃或-20℃保存。

需要注意的是，HEPES緩沖液的使用終濃度為10-50mmol/L，對(duì)細(xì)胞無毒性作用。一般情況下，濃度為20mmol/L的HEPES即可達(dá)到緩沖能力。現(xiàn)在市售HEPES為約10g包裝的小瓶，大家根據(jù)實(shí)際情況正確靈活配制就可以。

看完如何選擇緩沖液，HEPES緩沖液的配制方法這篇文章后，相信你對(duì)緩沖液也有進(jìn)一步的了解，由于緩沖液多見用于科研實(shí)驗(yàn)上，所以我們?cè)趯?shí)驗(yàn)過程中一定要保證產(chǎn)品的質(zhì)量，了解相關(guān)的配制方法及使用方法等都是每一個(gè)實(shí)驗(yàn)人員需要知道的，如果你對(duì)緩沖液還有什么好的見解，歡迎和我們一起來討論。
 

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