考馬斯亮藍(lán)染色法

    考馬斯亮藍(lán)染色法

    考馬斯亮藍(lán)染色法也稱考馬斯藍(lán)法(coomassiebluestaining)又稱Bradford法。是測(cè)定蛋白質(zhì)含量屬于染料結(jié)合法的一種。由于其突出的優(yōu)點(diǎn)，正得到越來(lái)越廣泛的應(yīng)用。下面遠(yuǎn)慕生物就著重介紹下考馬斯亮藍(lán)染色法原理，希望對(duì)您是有幫助的。

    考馬斯亮藍(lán)染色步驟：

    1、電泳結(jié)束后，切取少量含有MARK蛋白以及少許樣品的小部分凝膠進(jìn)行染色，其余部分用保鮮膜包好，放在4℃冰箱保存。取凝膠放入適量考馬斯亮藍(lán)染色液中，確保染色液可以充分覆蓋凝膠。置于水平搖床或側(cè)擺搖床上緩慢搖動(dòng)，室溫染色1小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間。注：具體的染色時(shí)間取決于凝膠的厚度和染色時(shí)的溫度。凝膠較厚，溫度較低，則染色時(shí)間宜適當(dāng)延長(zhǎng)。凝膠較薄，溫度較高，則染色時(shí)間可以適當(dāng)縮短。通常染色至凝膠的顏色和染色液的顏色非常接近，在染色液中幾乎看不清凝膠時(shí)，可以認(rèn)為已染色充分。染色2-4個(gè)小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間不會(huì)對(duì)最終的染色效果產(chǎn)生負(fù)面影響。

    2、倒出染色液。染色液可以回收重復(fù)使用至少2-3次。

    3、加入適量考馬斯亮藍(lán)染色脫色液，確保脫色液可以充分覆蓋凝膠。置于水平搖床或側(cè)擺搖床上緩慢搖動(dòng)，室溫脫色4-24小時(shí)。期間更換脫色液2-4次，直至藍(lán)色背景基本上全部被脫去，并且蛋白條帶染色效果達(dá)到預(yù)期。通常蛋白條帶在脫色1-2小時(shí)后即可出現(xiàn)。注：脫色期間可以在脫色液中加入一片吸水紙，可以使部分染料吸附在吸水紙上，加快脫色。脫色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)也會(huì)導(dǎo)致蛋白條帶的顏色變淺。

    4、完成脫色后，用ddH2O浸泡，至于未染色凝膠長(zhǎng)度相等時(shí)，參照MARK蛋白，與未染色凝膠對(duì)比，切下所需蛋白成分的凝膠，收集起來(lái)。然后把所要提純的蛋白從凝膠中分離出來(lái)。