考馬斯亮藍染色法

    考馬斯亮藍染色法

    考馬斯亮藍染色法也稱考馬斯藍法(coomassiebluestaining)又稱Bradford法。是測定蛋白質(zhì)含量屬于染料結(jié)合法的一種。由于其突出的優(yōu)點，正得到越來越廣泛的應用。下面遠慕生物就著重介紹下考馬斯亮藍染色法原理，希望對您是有幫助的。

    考馬斯亮藍染色步驟：

    1、電泳結(jié)束后，切取少量含有MARK蛋白以及少許樣品的小部分凝膠進行染色，其余部分用保鮮膜包好，放在4℃冰箱保存。取凝膠放入適量考馬斯亮藍染色液中，確保染色液可以充分覆蓋凝膠。置于水平搖床或側(cè)擺搖床上緩慢搖動，室溫染色1小時或更長時間。注：具體的染色時間取決于凝膠的厚度和染色時的溫度。凝膠較厚，溫度較低，則染色時間宜適當延長。凝膠較薄，溫度較高，則染色時間可以適當縮短。通常染色至凝膠的顏色和染色液的顏色非常接近，在染色液中幾乎看不清凝膠時，可以認為已染色充分。染色2-4個小時或更長時間不會對最終的染色效果產(chǎn)生負面影響。

    2、倒出染色液。染色液可以回收重復使用至少2-3次。

    3、加入適量考馬斯亮藍染色脫色液，確保脫色液可以充分覆蓋凝膠。置于水平搖床或側(cè)擺搖床上緩慢搖動，室溫脫色4-24小時。期間更換脫色液2-4次，直至藍色背景基本上全部被脫去，并且蛋白條帶染色效果達到預期。通常蛋白條帶在脫色1-2小時后即可出現(xiàn)。注：脫色期間可以在脫色液中加入一片吸水紙，可以使部分染料吸附在吸水紙上，加快脫色。脫色時間過長也會導致蛋白條帶的顏色變淺。

    4、完成脫色后，用ddH2O浸泡，至于未染色凝膠長度相等時，參照MARK蛋白，與未染色凝膠對比，切下所需蛋白成分的凝膠，收集起來。然后把所要提純的蛋白從凝膠中分離出來。