人高敏三碘甲狀腺原氨酸(u-T3)ELISA試劑盒實驗原理

試驗原理:
ELISA檢測試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知待測物質(zhì)濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將待測物質(zhì)和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中待測物質(zhì)的濃度呈比例關(guān)系。

試劑盒組成：


標本收集與試劑準備:
1.血清、血漿樣本收集應(yīng)使用一次性的無熱原，無內(nèi)毒素試管（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝均可），血清、血漿避免使用溶血，高血脂標本，標本懸浮物應(yīng)離心去除，使標本清澈透明。待測樣本應(yīng)盡早檢測，2-8℃保存48小時；更長時間須冷凍（-20℃或-80℃）保存，避免反復(fù)凍融。
2.洗滌液配置：用蒸餾水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的蒸餾水）
3.標準品配制：取7個1.5ml離心管，分別標注1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64，blank。從第壹至七管中分別加入標準品/樣品稀釋液200ul。在第壹管中加入標準品溶液200ul，置于漩渦混合器上混勻后用加樣器吸出200ul，移至第二管。如此反復(fù)作對倍稀釋，從第六管中吸出200ul棄去，第七管為空白對照。
4.生物素化抗體工作液配置:使用前20分鐘，用生物素化抗體稀釋液將100×生物素化抗體稀釋成1×工作液，根據(jù)所需用量配置，當(dāng)日使用，剩余棄之。
5.TMB顯色液的配置：使用前10分鐘，將TMB顯色液A液和B液1：1混合，避光放置備用。
6.如果您檢測的樣本中靶蛋白濃度高于標準品最糕值，建議重新檢測，請根據(jù)實際情況，適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議做預(yù)實驗，以確定稀釋倍數(shù))

自備物品
酶標儀（450nm）
高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
37℃恒溫箱

人高敏三碘甲狀腺原氨酸(u-T3)Elisa試劑盒操作注意事項
試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。
實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍，最終結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度。
嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
所有液體組分使用前充分搖勻。

洗板方法
手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。
自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步驟
從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；3.樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。
除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。
每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

結(jié)果判斷
繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應(yīng)OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。

試劑盒聲明
準確性：標準品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。
靈敏度：最低檢測濃度小于10 nmol/L。
特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
有效期：6個月

免責(zé)聲明
試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實驗者承擔(dān)，本公司概不負責(zé)。
嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔(dān)。