遠(yuǎn)慕教您如何分析高效液相色譜圖
2024-10-08 10:41 來源:上海遠(yuǎn)慕生物試劑
高效液相色譜法,你可以簡(jiǎn)單地想象,固定相是一個(gè)多空海綿狀的柱形結(jié)構(gòu),樣品在孔洞中進(jìn)進(jìn)出出。因?yàn)楦鱾€(gè)物質(zhì)的吸附能力不同,所以才會(huì)在色譜圖中拉開距離。
色譜圖,其實(shí)簡(jiǎn)單地講,是一個(gè)橫坐標(biāo)是時(shí)間,縱坐標(biāo)是電信號(hào)的二維圖譜。
高效液相色譜法,你可以簡(jiǎn)單地想象,固定相是一個(gè)多空海綿狀的柱形結(jié)構(gòu),樣品在孔洞中進(jìn)進(jìn)出出。因?yàn)楦鱾€(gè)物質(zhì)的吸附能力不同,所以才會(huì)在色譜圖中拉開距離。
和實(shí)驗(yàn)相關(guān)的參數(shù):
1、保留時(shí)間-也就是可以定性的數(shù)據(jù)參數(shù)
如果使用同樣的色譜柱,同樣的流動(dòng)相,分析同樣的樣品,那么這個(gè)樣品的保留時(shí)間,應(yīng)該是固定的。不同保留時(shí)間的色譜峰,應(yīng)該表現(xiàn)出的是不同的物質(zhì)。如果你跑的是反相色譜,那么色譜峰越靠后,它對(duì)應(yīng)物質(zhì)的極性也就越小。
2、峰面積-也就是可以定量的數(shù)據(jù)參數(shù)
這是你在色譜圖中可以讀出來的參數(shù),在同一個(gè)色譜條件下,同一個(gè)物質(zhì)的濃度和峰面積是成正比的。也就是說,如果你配制1.0mg/ml的X物質(zhì),進(jìn)樣后峰面積是10000,那么,你配制0.5mg/ml的X物質(zhì),進(jìn)樣后峰面積差不多就是5000
3、波長(zhǎng)-這個(gè)是可以順利進(jìn)行試驗(yàn)的前提條件
同一樣品,同一方法,同一色譜柱,在不同波長(zhǎng)的峰面積是不同的。一個(gè)物質(zhì)指在某些特殊波長(zhǎng)下有吸收。比如一個(gè)物質(zhì)在210nm和254nm處有吸收。那么波長(zhǎng)在280nm處可能無(wú)法檢出該物質(zhì)。所以一個(gè)實(shí)驗(yàn)方法開始時(shí)要進(jìn)行波長(zhǎng)掃描。