人抗染色體抗體(anti-chromosome Ab)ELISA試劑盒說明書

本試劑盒僅供研究使用。

使用目的: 本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中抗染色體抗體(anti-chromosome Ab)含量。

實驗原理:
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中抗染色體抗體(anti-chromosome Ab)水平。用純化的人抗染色體抗體(anti-chromosome Ab)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入抗染色體抗體(anti-chromosome Ab),再與 HRP 標(biāo)記的抗染色體抗體(anti-chromosome Ab)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過 洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的抗染色體抗體(anti-chromosome Ab)呈正相關(guān)。用酶/標(biāo)/儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人抗染色體抗體(anti-chromosome Ab)濃度。

劑盒組成
1     30倍濃縮洗滌液     20ml×1瓶     7     終止液     6ml×1瓶
2     酶標(biāo)試劑     6ml×1瓶     8     標(biāo)/準(zhǔn)品     0.5ml×1瓶
3     酶標(biāo)包被板     12孔×8條     9     標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液     1.5ml×1瓶
4     樣品稀釋液     6ml×1瓶     10     說明書     1份
5     顯色劑A液     6ml×1瓶     11     封板膜     2張
6     顯色劑B液     6ml×1/瓶     12     密封袋     1個

標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制/辣/根/過/氧/化/物/酶的(HRP)活性。

操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
5 號標(biāo)準(zhǔn)品     150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
4 號標(biāo)準(zhǔn)品     150μl 的 5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3 號標(biāo)準(zhǔn)品     150μl 的 4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2 號標(biāo)準(zhǔn)品     150μl 的 3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1 號標(biāo)準(zhǔn)品     150μl 的 2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣品最終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復(fù) 5 次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同 3。
8.洗滌:操作同 5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15 分鐘.
10.終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進行。

計算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD 值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。

注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間 控制在 5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線, 做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔 孔的OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計算時請 乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴(yán)格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶/標(biāo)/儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。

儲存條件及有效期
1.試劑盒保存:2-8℃。
2.有效期:6 個月