人抗腮腺管抗體(anti-parotid duct Ab)elisa試劑盒檢測原理

人抗腮腺管抗體(anti-parotid duct Ab)elisa試劑盒 檢測原理
本試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)來檢測樣品的濃度。往預(yù)先包被捕獲抗體的包被微孔中，依次加入樣本、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。再用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺與檢測樣品中檢測物的濃度呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中檢測物的含量。

試劑盒組成
名稱    48孔配置     96孔配置      保存
酶標(biāo)板(可拆卸)    1×48      1×96    2-8℃
標(biāo)準(zhǔn)品    0.3ml×6管    0.3ml×6管    2-8℃
酶標(biāo)試劑     5ml×1瓶     10ml×1瓶     2-8℃
樣品稀釋液    3ml×1瓶     6ml×1瓶    2-8℃
顯色劑A液       3ml×1瓶    6ml×1瓶    2-8℃
顯色劑B液     3ml×1瓶    6ml×1瓶    2-8℃
終止液    3ml×1瓶    6ml×1瓶    2-8℃
20倍濃縮洗滌液    15ml×1瓶    25ml×1瓶    2-8℃
封板膜      2片     2片     
密封袋      1個      1個      
說明書      1份     1份     

試驗所需自備物品
1.酶標(biāo)儀(450nm波長濾光片)
2.高精度移液器，EP管及一次性吸頭
3.37℃恒溫箱，雙蒸水或去離子水
4.吸水紙

操作步驟
1.標(biāo)準(zhǔn)品的加樣：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；。
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑100μl，空白孔除外。
4.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
5.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
6.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
7.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
8.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
9.測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

計算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，
即為樣品的實際濃度。

注意事項
1.試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
2.實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
3.不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4.使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6.洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
7.底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8.加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
9.按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
10．試劑盒保存：；2-8℃。
11．有效期：6個月