【結(jié)締組織染色】彈力纖維與膠原纖維染色實驗

實驗方法原理

彈力纖維由隨機交聯(lián)盤繞的一些肽鏈組成，含有豐富的二硫鍵糖蛋白成分，所以可稱為彈性蛋白。易與染色液中堿基結(jié)合，為了能夠更好地顯示彈力纖維和膠原纖維成分，選用維多利亞藍、麗春紅和苦味酸組合雙重染色方法。

實驗材料

石蠟組織切片

試劑、試劑盒

維多利亞藍 糊精 間苯二酚 蒸餾水 乙醇 三氯化鐵水溶液 濃鹽酸 苯酚二甲苯 中性樹膠

儀器、耗材

60 ℃恒溫箱 濾紙

實驗步驟

維多利亞藍染色液：維多利亞藍（Victoria blue）2 g，糊精 0.5 g，間苯二酚 4 g，蒸餾水 200 ml。將上述物質(zhì)混合后加熱煮沸，邊煮邊攪拌，約 5min。然后用另一容器取 30％ 三氯化鐵水溶液 25 ml，另行加熱煮沸后慢慢倒入上述混合液中，繼續(xù)煮沸 3 min，不斷攪拌溶液呈膠凍狀。去火，冷卻過濾，將濾紙上的殘渣連同濾紙一起放在 60℃ 恒溫箱中烤干。殘渣呈深藍色細顆粒狀粉末，再將其溶于 400 ml 的 70％ 乙醇液中。然后加濃鹽酸 4 ml 和苯酚 5 g，放置至成熟后使用。

1. 石蠟組織切片，常規(guī)脫蠟至水。

2. 切片入 70％ 乙醇中洗 2 min。

3. 將切片浸入盛有維多利亞藍液中染 2～5 h。

4. 直接入 95％ 乙醇中分色數(shù)秒鐘。

5. 用蒸餾水洗 2 min。

6. 用麗春紅-苦味酸染色液滴染切片 3 min。

7. 直接用無水乙醇沖洗多余染色液 2 次。

8. 二甲苯透明和中性樹膠封固。

注意事項

1. 維多利亞藍染色液可在室溫中存放較長時間，染色液浸染后倒回原處，可反復使用。

2. 95％ 乙醇分色后，立即浸入水中，可用顯微鏡觀察染色程度，如果較淺或較深，可再重復染色或分色。

其他

結(jié)果：彈力纖維呈藍綠色，膠原纖維呈紅色，背景呈黃色。