人chemerin ELISA試劑盒使用說明書

產(chǎn)品名稱：人Chemerin(RARRES2)ELISA試劑盒
英文名稱：Human Retinoic acid receptor responder protein 2 ELISA Kit
產(chǎn)品規(guī)格：96T

本試劑盒采用夾心法酶聯(lián)免疫吸附法，用于體外定量分析人血清、血漿、細胞裂解液或細胞培養(yǎng)上清中Chemerin的含量。預(yù)先包被的抗體和檢測相抗體都是Chemerin多克隆抗體。檢測抗體經(jīng)生物素標(biāo)記。樣品和生物素標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后，PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng)；經(jīng)過PBS或TBS的徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的Chemerin呈正相關(guān)。

Chemerin也稱TIG2或RARRES2，分子量為18KD。Chemerin基因在體內(nèi)可以表達出一種具有低活性的復(fù)合蛋白，即前體prochemerin，經(jīng)細胞外蛋白酶水解作用，prochemerin可以轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂懈呋钚缘腸hemerin蛋白。Chemerin主要表達在白色脂肪組織、肝、卵巢等組織中。

檢測指標(biāo)：Retinoic acid receptor responder protein 2；RARRES2；Chemerin；Tazarotene-induced gene 2 protein；TIG2
檢測范圍：780pg/ml～50ng/ml
特異性：系統(tǒng)與其他細胞因子無交叉反應(yīng)
敏感性：＜5pg/ml

產(chǎn)品組成：

組分	規(guī)格	數(shù)量
預(yù)包被抗人Chemerin抗體的96孔板	96T	1板
重組人Chemerin標(biāo)準(zhǔn)品(凍干)	50ng/管	2管
生物素標(biāo)記抗人Chemerin(100X)	130μl	1管
親和素-過氧化物酶復(fù)合物(ABC)(100X)	130μl	1管
樣品稀釋液	30ml	1瓶
抗體稀釋液	12ml	1瓶
ABC稀釋液	12ml	1瓶
TMB顯色液	10ml	1瓶
TMB終止液	10ml	1瓶
洗滌緩沖液(25X)	20ml	1瓶
封板膜		4張

儲存條件：2-8℃（頻繁使用時），-20℃（長時間不用時）。
有效期：6個月(4℃)；12個月（-20℃）。

參考標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)：(取自某一批次質(zhì)檢數(shù)據(jù)，僅供參考，用戶需要自己建立標(biāo)準(zhǔn)曲線)

濃度(ng/ml)	0	0.78	1.56	3.12	6.25	12.5	25	50
OD值	0.008	0.349	0.577	0.854	1.079	1.315	1.459	1.639

操作步驟
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照隨貨說明書中圖表在小試管中進行稀釋。
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。 
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

計算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。