革蘭氏染色配制及染色方法實驗步驟

實驗方法原理：本染色法是最基本的染色法，可使用于標本涂片或菌落涂片。染色結果將細菌分為革蘭氏陽性和革蘭氏陰性兩類。

實驗步驟    

一、實驗試劑：

1. 結晶紫溶液：

A液：結晶紫：2g，95%乙醇：20ml。

B液：草酸銨：0.8g，蒸餾水：80ml。

需在用前24小時將A液. B液混合，過濾后裝入試劑瓶內(nèi)備用。

2. 碘液：

碘：1g，碘化鉀：2g蒸餾水：300ml。

出碘與碘化鉀混合并研磨，加入幾毫升水，使其逐漸溶解，然后研磨，繼  續(xù)加入少量蒸餾水至完全溶解，最后補足水量。

也可用少量蒸餾水，先將碘化鉀完全溶解，再加入碘片，待完全溶解后，加水至300ml。

3. 脫色液：95%乙醇。

4. 復染液：

A.貯存液：沙黃：2.5g，95％乙醇：100ml。

B.應用被：A液：10ml，蒸餾水：90ml。

菌片制備：染色的第一步是制作涂片。菌液涂片時，用接種環(huán)蘸取菌液點在載玻片上，標本可直接在玻片上涂布，菌落涂片時，先取生理鹽水1滴，置玻片上，用接種針挑去菌落，在鹽水中涂布。涂片時必須注意應輕輕操作。猛烈的動作會改變菌細胞原有的排列形式，或造成細菌鞭毛脫落，影響結果的準確性。制備的涂片應自然干燥，并經(jīng)火焰固定，固定溫度不易過高，以玻片背面接觸手背不燙為準，否則可能使細胞形態(tài)改變。將固定后的涂片進行染色。

二、染色方法：

l. 涂片經(jīng)火焰固定，加結晶紫液染1min，清水沖去染液。

2. 加碘液染1min，水洗。

3. 加脫色液，不時搖動約30秒，至無紫色脫落為止，水洗。

4. 加復雜液，染30秒，水洗。

5. 干后鏡檢。